马铃薯Y病毒一步RT-PCR检测试剂盒的研制

马铃薯 Y 病毒 ( Potato virus Y, PVY) 对马铃薯的危害最大, 可导致马铃薯退化, 降低马铃薯产量。 解决这一问题的重要途径就是培养脱毒种薯, 但是否完全脱毒需要经过检测才能证实。本研究依据 PVY CP 基因序列设计合成了一对引物 PY1、PY2, 以带毒样品植物总 RNA 为模板, 在同一个反应中同时加入反转录和PCR反应所需试剂, 反应程序中包括反转录和 PCR 反应所需条件, 进行反应扩增, 带毒样品扩增得到 340 bp 的目的条带, 而健康对照无此目的条带, 从而建立了 PVY 的一步 RT- PCR 检测技术, 并组装成试剂盒。该试剂盒具有良好的稳定性和特异性, 灵敏度可以检测到带毒植物组织下限的 6.25 μg, 高于 ELISA ( 100 μg) 和 NASH ( 15 μg) 的灵敏度, 虽然和常规方法的灵敏度相同, 但更为快速、简便、易于操作, 适合脱毒苗和脱毒种薯生产单位做大量样品的检测。