锤子
一、实验目的 学习并掌握α-淀粉酶的制备工艺。 二、实验原理 α-淀粉酶广泛存在于植物、哺乳动物和微生物中。α-淀粉酶是内切酶,酶的作用点仅限于淀粉链的α-1,4糖苷键,对α-1,6糖苷键不能作用,但能越过α-1,6糖苷键,将α-1,4糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精,而使淀粉对碘呈蓝紫色的特异性反应逐渐变红棕色。在酶解的最初阶段,α-淀粉酶对淀粉的水解速度很快,但当水解到一定程度后,水解虽在继续进行,水解速度却变得缓慢。该酶的最小作用底物是麦芽三糖以上的低聚糖,对麦芽三糖的作用很弱,对麦芽糖没有水解能力。 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是当今工业酶制剂的主要生产菌种之一,主要用于生产淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等。本实验利用高产α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌T2生产α-淀粉酶用于制备淀粉水解糖。 三、实验器材 1.菌种:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T2 2.仪器:洁净工作台、灭菌锅、振荡培养箱、高速冷冻离心机、高压灭菌锅 四、实验步骤 1.培养基的制备与灭菌 发酵培养基:蛋白胨5g,酵母膏2.5g,葡萄糖0.5g,可溶性淀粉2.5g,KH2PO4 1g,MgSO4.7H2O 0.25g,CaCl2.2H2O 0.1g,H2O 500mL,pH7.0。分装于100mL锥形瓶中,每瓶50mL,121℃灭菌20min。 2.接种与产酶培养 接种环灼烧灭菌后,轻轻刮取斜面种子培养基中的少量菌体,接入液体培养基中,并使环在液体与管壁接触的部位轻轻摩擦,使菌体分散于液体中。37℃振荡培养48 h。 3.离心 将发酵液置高速冷冻离心机中10000r/min离心10 min,除菌体,上清液即为α-淀粉酶粗酶液。
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