上海科哲-高效液相色谱_荧光检测法测定尿中1_羟基芘

［目的］通过 C18固相萃取小柱洗脱液浓缩与不浓缩试验对比，改进尿样中 1-羟基芘的高效液相色谱 － 荧光检测器测定方法。［方法］取2 组相同尿样，经酶避光水解后，通过 C18固相萃取小柱进行富集，甲醇洗脱。一组对洗脱液进行氮吹浓缩后定容至1． 5 ml，另 一组直接洗脱定容至 1． 5 ml，然后，使用高效液相色谱 － 荧光检测器检测。以 V乙腈 ∶V水 = 75∶25 为流动相，等度洗脱，流速为 1 ml/min，荧光检测器 λex = 275 nm，λem = 430 nm。［结果］浓缩后测定的 1-羟基芘的值为不浓缩测定值的 72． 9% ～ 80． 6% 。利用不浓缩的酶水解高效液相色谱 － 荧光检测器法测定尿样中的 1-羟基芘，检出限为 0． 02 ng /ml，在给定浓度范围内，1-羟基芘的峰面积与浓度有良好的线性关系，线性回归方程为 y = 2． 404 1x － 0． 083( r = 0． 999 9) ，加标回收率为 94． 8% ～ 108． 7% ，平均相对标准偏差为 2． 7%。［结论］不浓缩 的酶水解高效液相色谱 － 荧光检测器法可用于测定尿样中的 1-羟基芘，且该方法具有操作简单，灵敏度、精密度高，重现性、回收率好的特点。