上海闪谱-蛋白纯化系统-低温胁迫小麦苗冰结构蛋白纯化的研究

以研究低温胁迫小麦苗冰结构蛋白( ISP) 纯化为目的，以小麦苗为对象，经低温胁迫，并采用粗分离、饱和硫酸铵溶液沉淀、DEAE－Cellulose 52 层析、sephadex－G75 凝胶层析 4 个步骤对其中 ISP 进行纯化，分别采用差示扫描量热法( DSC) 、热休克处理法和聚丙烯酰氨凝胶电泳( SDS－PAGE) 测定各纯化步骤所得 ISP 的热滞活性( THA) 、冰晶重结晶抑制能力( ICP) 和分子质量( MW) ，并计算小麦苗存活率和各纯化步骤的得率。实验结果表明，梯度低温胁迫的小 麦苗存活率与恒温低温胁迫相比提高了 240% ，小麦苗提取物( AWSE) 中蛋白质含量与未低温胁迫小麦苗提取物( NAWSE) 相比提高了 7.8% ; 以 THA 表征的纯化倍数( T1 ) 和以 ICP 表征的纯化倍数( T2 ) 分别为 451.15 和 137.60，得率为 2.85% ，THA 为 0.180 ℃ ( 5 mg /mL) ，ICP 为 70.03% ，分子质量范围为 20.1～31.0 ku; 与 THA 相比，ISP 在较低浓度下即可达到 ICP 的峰值。小麦苗可作为制备冰结构蛋白的天然植物资源。