包纳米虫（Bona）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）使用说明书

包纳米虫（Bona）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书 产品仅用于科研产品名称:包纳米虫（Bona）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 规格:48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管 技术服务内容： 实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。 使用方法: 一、样品 RNA 的制备 1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout 2、或柱式病毒 RNAout。 二：RT（逆转录）反应合成 cDNA 1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系） 2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。 3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI）， 反应终体积为 20μL。 4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。 5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。 实验注意事项： 1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况； 2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号； 3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。 4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。