鲁氏不动杆菌PCR试剂盒PCR 检测试剂盒使用说明书

鲁氏不动杆菌PCR试剂盒PCR 检测试剂盒操作方法 样本的处理（在样本制备区进行）： 取 n 个灭菌的 1.5 mL Eppendorf 管，其中 n 为被检样品与阴性对照的和（阳性对照、阴性对照在试剂盒中已标出），做标记。(注：试剂盒中的阳性对照直接作为 PCR 检测的模板，无需提取核酸) 每管加入 600 ?L 裂解液，分别加入被检样本和阴性对照各 200 ?L，一份样本换用一个吸头，再加入 200 ?L 氯仿，混匀器上振荡混匀 5 s（不能过于强烈，以免产生乳化层，也可以用手颠倒混匀），于 4℃ 12 000 r/min 离心 15 min。 取与 4.1.1.1 相同数量灭菌的 1.5 mL Eppendorf 管，加入 500 ?L 异丙醇（-20℃预冷）， 做标记。吸取 4.1.1.2 各管中的上清液转移至相应的管中，上清液应至少吸取 500?L，不能吸出中间层，颠倒混匀。 于 4 ℃、12 000 r/min 离心 15 min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，沾干液体(不同样品须在吸水纸不同地方沾干)；加入 600 ?L 75％ 乙醇，颠倒洗涤。 于 4 ℃、12 000 r/min 离心 10 min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，尽量沾干液体（不同样品须在吸水纸不同地方沾干）。 4 000 r/min 离心 10s（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），将管壁上的残余液体甩到管底部，小心倒去上清，用微量加样器将其吸干，一份样本换用一个吸头，吸头不要碰到有沉淀一面，室温干燥 3 min，不能过于干燥，以免 RNA 不溶。 加入 11 ?L DEPC 水，轻轻混匀，溶解管壁上的 RNA，2 000 r/min 离心 5 s，冰上保存备用。注：提取的 RNA 须在 2 h 内进行 PCR 扩增；若需