【应用文章下载】利用基于 HTRF 的 Tag-lite 技术检测胰高血糖 素 GLP-1 受体的 Kd 值

Cisbio 的 Tag-lite HTRF 平台能 够 有效 地 用 HTRF 荧 光 团标记目标位点上感兴趣的蛋白。细胞表面受体可以插 入 SNAP-tag 质粒中，然后用这种结构转染细胞并表达 标记的受体。通过添加 snap -lumi4-Tb 底物，用铽 (Tb) 穴状化合物标记受体。为了进行结合试验，受体的配体 用 HTRF 受体荧光团标记，例如 d2。当 d2 配体与铽标 记的受体结合时，可以使用具备 HTRF 功能的微孔板读 板机检测受体到配体的时间分辨荧光共振能量转移 (TRFRET) ( 图 1)。 Cisbio 提供了多种标签和兴趣蛋白标记编码的质粒，以 及已经用这些结构物转染的冷冻细胞。该结构体能够表 达标记蛋白，如受体，可以用铽标记，同时其受体配体 ( 激动剂或拮抗剂 ) 用受体荧光团标记。Tag-lite 平台适 用于广泛的应用，如受体二聚化、配体结合分析和第二信 使评估。结合动力学可以研究药物 - 蛋白质复合物的结 合和解离速率，是优化候选药物体内疗效的必要步骤 。