阈值法检测人用狂犬病疫苗DNA残留量

　　目的：建立一种阈值法( threshold method)检测人用狂犬病疫苗Vero 细胞DNA 残留量的方法。方法：取人用狂犬病疫苗进行DNA 抽提后，与内控品经高温变性、冰浴后，37 ℃水浴 1 h，加入生物素标记的单链 DNA 结合蛋白( single stranded binding protein，SSB)和尿素酶标记的抗单链 DNA ( single stranded DNA，ssDNA)的单抗，与变性的宿主细胞DNA 结合形成复合物，经过滤、洗涤后，将复合物吸附于硝酸纤维素膜上，置Threshold 仪器样品检测池中，检测DNA含量。对建立的阈值法测定人用狂犬病疫苗Vero 细胞DNA残留量的方法进行线性范围、准确性及精密度验证。结果 该方法的最低检测限为 3 pg / 500 μl，线性范围为 3 ~ 200 pg / 500 μl，DNA 内控品浓度的对数与相应的检测信号值的对数呈良好的线性关系( R2 = 0. 98);该方法检测不同企业疫苗样品的回收率为 99% ~ 124%，变异系数为8. 5%，加入内控品后再抽提，不同企业疫苗样品的回收率为 48% ~ 128%，变异系数为 32. 9%;同1 批疫苗重复10次的检测结果的CV值为 7. 8%，同 1 批疫苗不同时间检测结果的 CV 值为 11. 8%。 结论：阈值法可检测人用狂犬病疫苗Vero 细胞宿主DNA 残留量，该方法操作简便，灵敏度好，准确性及精密度高，对人用狂犬病疫苗生产和质量控制具有较好的指导意义。