其他null检测 | 使用Q Exactive系列高分辨质谱对ADC与mAb进行变性及非变性条件下分子量测定-赛默飞色谱与质谱

方案摘要

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应用领域	生物产业
检测样本	其他
检测项目
参考标准	Q Exactive 系列高分辨质谱平台

基于 Orbitrap 技术的 Q Exactive Plus Biopharma 质谱平台，在完成常规肽图分析、变性质谱条件下测定蛋白分子量的同时，还可以与体积排阻色谱串联，方便快捷的测定非变性条件下 ADC 样品，尤其是 Cys 偶联样品的分子量。

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配置单

赛默飞Trace1300E 气相色谱仪
型号：Trace1300 E

¥30万 - 50万
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方案详情

随着生物制药工业的发展，通过将单克隆抗体本身的二硫键打开，由此在半胱氨酸的自由巯基上偶联小分子药物的 ADC 越来越多。由于此类 ADC 分子链间的二硫键被打开，其轻/重链之间仅靠非共价键结合，在传统的变性质谱条件下会解离成抗体片段，无法测定完整蛋白的分子量。非变性质谱（Native MS）是一种近年来得到不断发展和推广的新兴分析技术，可以在保持蛋白非共价作用力条件下进行分子量测定，采用非变性质谱进行 cysteine-linked ADC 分析显示了强大的应用潜力。
Thermo ScientificTM Q ExactiveTM Plus Biopharma 平台质谱仪保持了 Orbitrap 超高分辨质谱平台的固有优点，如高分辨率、高质量精度和高灵敏度兼具，在此基础上又对其 mass range 做了进一步扩展，新增的 High Mass Range Mode（HMR Mode）m/z 上限可至 8000 Da，同时又针对高质量端离子传输进行了优化，进一步提高了高质量端离子的传输效率，并改进了 HCD 的压力调节。该平台包括三种不同分析模式（Standard Mode、Protein Mode 及 HMR mode），可覆盖生物制药领域的表征全流程。

    在本实验中，我们在 Q Exactive 系列高分辨质谱平台上，分别采用变性质谱条件和非变性质谱条件，对 Cys 偶联的 ADC 和与之对应的 mAb 样品进行了分子量测定。在变性质谱平台上，mAb 的分子量可以得到精确解析，ADC 样品由于其非共价结合被破坏，被检测到的主要是 1/2ADC 形式，可观察到其典型的糖型与小分子药物偶联分布。
    在非变性质谱实验中，将体积排阻色谱与 Q Exactive Plus Biopharma 高分辨质谱平台联用，使用其专为完整蛋白分析所设置的 HMR（High Mass Range）模式对 ADC 及 mAb 样品进行分子量测定，可在保持 ADC 非共价结合的状态下测定其分子量与糖型、偶联不同药物的分布；实验中使用了 17500/35000 两档分辨率，发现随着分辨率的提高，可以将样品峰与杂质峰分离开，从而更准确的测定样品分子量。
    通过本实验不难得知，基于 Orbitrap 技术的 Q Exactive Plus Biopharma 质谱平台，在完成常规肽图分析、变性质谱条件下测定蛋白分子量的同时，还可以与体积排阻色谱串联，方便快捷的测定非变性条件下 ADC 样品，尤其是 Cys 偶联样品的分子量。

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文献贡献者

赛默飞色谱与质谱

钻石会员丨第23年

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