方案摘要
方案下载应用领域 | 制药/生物制药 |
检测样本 | 生物药品药物研发 |
检测项目 | 含量测定>色谱法, 质谱法 |
参考标准 | 国家标准 |
本次实验基于优化的样品前处理、纳升液相系统与Orbitrap高分辨质谱,建立了迄今为止最高灵敏度的质谱HCPs检测方法,并利用内标蛋白进行准确的相对定量。由于我们没有查到NIS抗体标准品ELISA定量结果,所以未进行进一步对比质谱与ELISA的一致性。接下来将利用此方法对商品化的抗体药物进行HCPs的定性和相对定量,以及考察方法的重现性。
重组蛋白类药物是由遗传修饰的原核或真核宿主细胞培养/发酵产生,在此过程中,宿主细胞也共同产生与正常细胞功能相关的蛋白质,由于细胞凋亡/死亡/裂解,其他非必需蛋白质也可能释放到细胞培养基/发酵液中,因此残留在终产品中的其他蛋白质即为宿主细胞残留蛋(HCPs)。HCPs的存在主要影响药物的安全性和有效性,如引起机体免疫反应,作为佐剂以增强对药物产品的免疫应答,以及具有蛋白水解活性的HCPs影响药物产品的稳定性[1][2][3],因此生物医药公司不断优化其纯化工艺,从而控制终产品中HCPs的种类和含量。ICH 的Q6指导方针指出需采用具有高灵敏度和宽动态范围的方法监测HCPs,要求其含量尽可能的低,甚至低于检测限,不同产品要求不同,一般在1-100ng/mg(1-100ppm)范围内,然而并未规定其检测的具体分析方法。目前Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)因其具有高灵敏度、高通量和易操作优势成为工业界的金标准,但其存在很多限制,包括不能对HCPs进行精准鉴定,低丰度HCPs的检测易受限于高丰度蛋白的干扰,定量动态范围(3个数量级)较低,抗体受限,开发周期长,无法改变已有的方法,缺少校正标准限制定量的准确性,因此需多种检测方法相结合[4]。随着高分辨质谱技术性能的不断提升,已具有高灵敏度和宽的定量动态范围,以及蛋白质组学技术的飞速发展,可实现对未知蛋白质的高通量定性和定量。但由于HCPs含量极低,且酶切后与高含量的主成分存在共洗脱,对低含量HCPs的鉴定仍存在挑战,为进一步提升质谱检测方法的动态范围,需对样品前处理及液相方法进行优化。
本次实验基于优化的样品前处理、纳升液相系统与Orbitrap高分辨质谱,建立了迄今为止最高灵敏度的质谱HCPs检测方法,并利用内标蛋白进行准确的相对定量。由于我们没有查到NIS抗体标准品ELISA定量结果,所以未进行进一步对比质谱与ELISA的一致性。接下来将利用此方法对商品化的抗体药物进行HCPs的定性和相对定量,以及考察方法的重现性。
优选 赛默飞Q Exactive Plus LCMS 系统
型号:Q Exactive Plus LCMS优选 赛默飞UltiMate 3000 纳升级液相色谱
型号:UltiMate 3000 RSLCnano新品 优选 Orbitrap Ascend Editions Tribrid系列超高分辨质谱仪
型号:Orbitrap Ascend Editions Tribrid系列超高分辨质谱仪新品 优选 Thermo Scientific™ Stellar™质谱仪
型号:Thermo Scientific™ Stellar™质谱仪高压离子色谱Inuvion快速测定自来水中的常见阴离子
高压离子色谱Inuvion快速测定生活饮用水中的亚氯酸 盐、溴酸盐、氯酸盐、二氯乙酸和三氯乙酸
Thermo Fisher Scientific iCAP TQe ICP-MS/MS测定土壤和沉积物多种元素
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