腺相关病毒 (Adeno-associated viruses, AAV) 作为一种基因递送工具,具有安全性好、免疫原性低、能感染分裂细胞和非分裂细胞,能介导基因的长期稳定表达等优点,是目前基因治疗中的首选载体,包括天然型(AAV)和重组型(rAAV)在内多种血清型。常用的AAV血清型有AAV1,2,5,6,7,8,9,rh10等,不同AAV血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构,由于其组织特异性(或亲嗜性)不同而被广泛应用。
图1. AAV载体疗法占在研病毒载体基因疗法的约80%
图2. 不同血清型组织递送特异性
AAV关键质量属性评估
之病毒颗粒数
2022年5月,国家药监局药审中心发布《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则(试行)》通告,病毒颗粒数是重要的质量分析指标之一。全新推出的Octet® AAVX腺相关病毒定量生物传感器(货号:18-5160),消除目前定量方法通量低、成本高、耗时长的技术瓶颈,一键解锁各类血清学AAV病毒衣壳定量!
AAV定量痛点
为提高AAV病毒载体的质量和产品,需要在多个工艺步骤中快速定量AAV浓度,来高效地优化生产工艺环节
目前的方法费时费力费钱,速度慢,难以优化
时效性差,流程复杂。客户需要将样品送到分析部门或实验室检测,等待2~5天才会有结果。工艺流程需要等待结果进行下一步工作开展或优化调整
Octet® AAVX定量解决方案
基于药典认可的生物层干涉(BLI)技术
5分钟即可一次性检测8/16/96个样品
AAVX生物传感器,一步法直接定量纯化或粗样品
可结合各种血清型:AAV1 ~ AAV9及AAVrh10
线性范围宽广:8.5×108 ~ 1×1013 vp/mL
可再生重复使用~20次,单个样品检测成本更低
Octet® BLI Discovery v.13.0.1 软件预设AAV定量模板
特异性高,动态范围广
Octet® AAVX传感器对AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9和AAVrh10等10种不同的AAV血清型具有良好特异性。
图3. Octet® AAVX对10种AAV血清型的特异性结合
大多数血清型的动态范围在8.5x108至1.0x1013 vp/mL之间,线性范围跨越5个数量级,无论高滴度和低滴度样品都能得到准确测量。且动态范围内测试的所有浓度均观察到良好的回收率 (80–120%) 和精密度 (CV<10%)。
图4. 使用Octet® AAVX生物传感器对纯化的AAV9衣壳定量
轻松消除基质干扰,粗样品表现优异
AAV的整个生产流程会用到不同的缓冲液和培养基基质,Octet® 对纯化样品和粗制样品均表现出优异的处理能力。使用样品稀释剂缓冲液对粗样品进行4倍至10倍稀释,即可显著减轻样品中基质效应。
点击了解不同血清型和
基质类型最小稀释系数
图6. 使用Octet® AAVX生物传感器对AAV9粗样品衣壳定量(含 1% Pluronic F-68的裂解缓冲液,稀释比例3:1;n=3)。结果显示浓度为3.05x109–2.22x1012 vp/mL。样品回收率在95–105%之间,并且受测浓度具有良好的精密度(CV<10%)。
与ELISA相关性
Octet® BLI搭配AAVX传感器可以实现快速的检测设置、分析和实时数据显示,从而能够监控和优化每个检测步骤。为了证实Octet® AAVX检测法和ELISA之间的相关性,来自BridgeBio Pharma和REGENXBIO公司的研究人员在AAV生物工艺流程的不同步骤测试了样品中的不同AAV血清型。
图7. 使用Octet® AAVX生物传感器和ELISA定量检测纯化样品及粗制样品(生物工艺中间体)中的AAV8和AAV9,数据显示两种方法具有良好的相关性。数据由REGENXBIO Inc.提供。
图8. 使用Octet® AAVX生物传感器和ELISA定量检测AAV生产上游和下游不同步骤中的AAV5(包括纯化样品及粗制样品)滴度。滴度范围为6.73x109至9.59x1013 vp/mL,证明Octet® AAVX检测法与ELISA之间具有良好的相关性。数据由BridgeBio Pharma, Inc.提供。
简单便捷,全面优化
方法 |
Octet® AAVX |
ELISA Kit |
ddPCR |
*与Octet® AAVX对比
基于Octet® BLI 和Octet® AAVX 生物传感器的AAV定量检测策略可广泛应用于AAV 上游和下游工艺各阶段,优化传统终点法耗时费力的确定,提供可靠、准确且便捷的AAV定量新思路。
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