2024国内Octet CNS赏析：蛋白、多肽、小分子全覆盖！

德国赛多利斯集团

2024/09/23 11:03

Octet®非标记分子互作系统采用的生物层干涉（BLI）技术是写入美国药典的互作技术，并得到中国药物评审机构认可，相关应用文章已经超过了15,000篇。与同类技术相比，Octet®具有使用方便、维护成本低等优点，并且能够对分子互作进行更加定量化的表征，使得分子互作数据更准确，因而在国内外被广范使用。

今天，陈老师就和大家一起赏析几篇2024年发表的国内CNS文章，分别来自东南西北四个地区，涉及蛋白、多肽和小分子等测试。

Nature

癌症耐药机制^[1]

中山大学第七附属医院

Warburg 效应是癌症的一个标志，指的是癌细胞倾向于厌氧代谢葡萄糖，而不是有氧代谢葡萄糖。癌症代谢如何影响化疗反应和DNA修复通常仍不完全清楚。本文报道了NBS1乳酰化促进同源重组（HR）介导的DNA修复。NBS1在赖氨酸388（K388）位点的乳酰化对于MRE11-RAD50-NBS1（MRN）复合物的形成和HR修复蛋白在DNA双链断裂位点的积累至关重要。高水平的NBS1 K388乳酰化预示着新辅助化疗的不良患者预后，使用乳酸脱氢酶A（LDHA）的基因耗竭或乳酸脱氢酶A抑制剂可以抑制 NBS1 K388 乳酰化，降低 DNA修复功效并克服对化疗的耐药性。总之，将NBS1乳酰化确定为导致化疗耐药性的基因组稳定性的关键机制，并确定抑制乳酸产生是一种有前途的癌症治疗策略。在这项研究中，Octet®用来检测NBS1与MRE11-RAD50复合物的结合。

图1. Octet®发现，只有乳酰化辅酶存在的情况下（NBS1乳酰化），NSB1才能与MRE11形成复合物

本文有大量Co-IP数据，但是还是需要用非标记和实时的Octet®分子互作分析系统进行验证，足以说明Octet®的准确性。

Cell

囊泡特异性运输机制^[2]

四川大学

囊泡运输是一个基本过程，它允许将特定货物蛋白质分选和运输到真核细胞的不同隔室。货物识别主要通过供体膜上的相关蛋白质进行。WDR11-FAM91A1 复合物在网格蛋白相关AP-1复合物的下游发挥作用，以促进蛋白质从内体转运到TGN（反式高尔基体网络）。本文报道了人类WDR11-FAM91A1复合物的冷冻电镜结构。WDR11直接特异性地识别酸性簇多肽（SAC）。WDR11复合物组装及其与含SAC的蛋白质的结合对于斑马鱼中含SAC的蛋白质的运输和神经元的正常发育是必不可少的。因此，该研究发现，货物蛋白可以以序列特异性方式被识别。在这项研究中，Octet®被用来检测WDR11-FAM91A1 复合物与酸性多肽的结合能力。

图2. Octet®结果：用NTA传感器固化WDR11-FAM91A1 复合物与酸性多肽进行结合解离，具有良好的浓度依赖性信号。

表1. Octet®检测WDR11-FAM91A1 复合物与一类酸性多肽簇的结合，并计算KD值

本文做了很多多肽的检测，Octet®因其高通量可以在短时间内完成这些实验。

Cell

病毒侵入机制^[3]

上海科技大学

冠状病毒的入侵是由宿主细胞受体对刺突蛋白的识别启动的，涉及蛋白质或聚糖受体。最近，TMPRSS2 被确定为HCoV-HKU1的蛋白受体。本文研究了非活性、聚糖激活和功能锚定状态下的HCoV-HKU1C刺突蛋白结构，揭示了唾液聚糖结合诱导刺突蛋白NTD结构域的构象变化，并促进刺突蛋白的相邻的RBD结构域开放以进行TMPRSS2识别。HCoV-HKU1A 的结构研究和诱变后结合能力测定证实了HCoV-HKU1采用的保守受体识别模式。这些研究促进了病毒-宿主相互作用的理解，为开发针对冠状病毒相关疾病的新疗法奠定了基础。本项研究中，Octet®主要被用于检测受体与病毒配体的分子互作。

图3. Octet®检测不同物种的TMPRSS2与RBD的亲和力，可见HCoV-HKU1的刺突蛋白也可以结合其他物种受体，提示其也可以感染其他物种

图4. Octet®测试结果：加入多糖9-O-Ac-Sia后，刺突蛋白与TMPRSS2的结合变强

当天背靠背三篇CELL都有Octet®数据（点这里），可见Octet®使用之广泛。

Science

脂肪肝新靶点^[4]

中国医学科学院基础医学研究所

肝细胞对预防非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）和其他慢性代谢性疾病具有重要意义。本文发现糖原合成使用其中间代谢物尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）来拮抗脂肪生成，从而引导小鼠和人肝细胞将葡萄糖碳储存为糖原。在这项机制研究中，发现UDPG通过SLC35F5转运进入高尔基体后，诱导site-1蛋白酶S1P的泛素化降解，从而阻断活性形式SREBP1c的生成，最终抑制脂肪酸的合成。通过Octet®非标记分子互作系统对小鼠和人的脂肪酸合成过程中关键酶（S1P）与UDPG结合这一重要步骤进行了验证，并提供了结合的直观证据。Octet®检测点突变结合界面的氨基酸残基位点后的S1P与UDPG的结合，进一步验证S1P-UDPG复合物结构解析的结果。