阿托伐他汀摄入剂量为每天10-80毫克,根据ICH-Q3指南,对于每日最大用量少于2.0克的药物,杂质的合格阈值应为0.15%。根据《European Pharmacopoeia》阿托伐他汀专栏,其杂质含量规定如下:相关杂质A和B为0.3%;C和D为0.15%;其他未指定杂质为0.1%。该标准旨在确保药物的安全性与有效性。
为此,沃特世运用ACQUITY UPLC™ H-Class系统、ACQUITY UPLC CSH™苯基己基柱和ACQUITY QDa II质谱检测器开发了一种快速、准确地识别和定量阿托伐他汀原料药杂质的分析方案。该方案还通过源碎片鉴定杂质,使得分析结果更深入、可靠。
在现有的紫外工作流程中采用ACQUITY QDa II质谱检测器对原料药中的杂质进行常规检测,可为最终用户带来显著的益处:
易于操作
精准量化
深入分析
规避误差
这种分析方法与Empower CDS软件相辅相成,使杂质分析过程更加简便、高效,确保数据合规性、完整性。
方案创新点与优势
安全性与稳定性 - 结果可靠
与《European Pharmacopoeia》相关专栏提出的方法不同,本分析方法考虑到四氢呋喃(THF)具有毒性和不稳定性,没有使用THF作为流动相的一部分,而是在水性流动相中加入醋酸铵缓冲液,在有机流动相中加入甲酸,以降低整个样品运行过程中的pH值并改善峰形。
高效性与经济性 - 适合大通量检测
本方法比《European Pharmacopoeia》专栏方法缩短了约60分钟,每次进样使用的溶剂量不到10%。
精确性与直观性 -数据精度高且易于处理
尽管大多数文献方法都选择了C18色谱柱,但事实证明CSH苯基己基色谱柱是提高阿托伐他汀化合物与相关杂质C分离度的更优选择。色谱柱温度设置为30 ℃,以削弱原料药的峰尾现象。
工作流程
为评估该方法的可重复性,对0.12%的阈值样品进行10次重复进样。
实验结果
高灵敏度与精确度
图1.加标阿托伐他汀样品(25 μg/mL)的PDA色谱图。
通过使用分流阀,杂质A和C可以在MS TIC色谱图中更清晰地显示出来。
图2.MS TIC色谱图使用分流阀定量分析杂质A [m/z 541.1] 和杂质C [m/z 557.1]。
优秀的线性
图3.阿托伐他汀原料药在0.01-5.0 μg/mL浓度范围内的校准曲线。
对选定的阿托伐他汀相关杂质进行了线性和灵敏度评估。所有情况下的R2值均超过0.998,残差率均小于16.3%。所有校准反应均为线性(1/X 加权)。
表1.杂质A、C和I的校准结果摘要。
尽管注入的原料药浓度可高达75 μg/mL,但在随后的空白进样中没有出现携带现象。
图4.杂质A在0.01-1.0 μg/mL浓度范围内的校准曲线。
较传统紫外色谱法的优势
相比PDA曲线,MS TIC色谱图更清晰地显示了另外一种未知杂质 - 未知杂质4的存在。且通过叠加空白样品,表明MS TIC色谱图中的未标记峰并非API样品独有。
图5.加标(0.12%)阿托伐他汀原料药样品(75 μg/mL)的叠加PDA色谱图(A)和MS TIC色谱图(B)。
图6.阿托伐他汀和阿托伐他汀相关杂质在1 μg/mL浓度下的质谱图。
对未知杂质2的m/z 451.2前体离子施加50 V锥孔电压,可产生m/z 422的碎片(图 7A)。这种碎片模式与去氟阿托伐他汀和相关杂质H相匹配。m/z 422后出现的m/z 380碎片表明该化合物更有可能是相关杂质H。
图7.未知杂质2(A)和未知杂质3(B)的质谱图,图中各部分下方显示了可能的杂质剖面和碎片模式。
在10℃下保存两周后,样品质谱图像的变化清晰地显示出存在与杂质A共洗脱的原料药光解降解成分。
图8.阿托伐他汀杂质A在制备样品15天后的质谱比较。
若采用传统紫外色谱法,则会观察到杂质A的相对含量似乎有所增加,得出错误结论。然而这种差异并不是杂质A的浓度变化导致,而是因为随着原料药的降解,一种与杂质A发生共洗脱的化合物的量增加。
图9.加标(0.12%)阿托伐他汀原料药样品(75 μg/mL)的紫外色谱图与MS TIC图像对比。
可重复性与稳定性
表2.加标(0.12%)阿托伐他汀原料药样品(75 μg/mL)的[254 nm,4.8 mm]PDA痕量中定量峰的相对面积百分比,连续重复n=10次。
Empower CDS数据报告功能
图10.Empower CDS生成的数据报告示例,用于分析添加了0.12%杂质A、C和I以及其他未知杂质的75 μg/mL阿托伐他汀样品。
在方法开发工作流程中增加质谱检测,可快速追踪峰并获得可靠的峰纯度,让您对分离的稳定性充满信心。
SYNAPT系列高分辨质谱又一力作 | 南开李功玉团队:助力微小差异蛋白构象高效解析
席位预订中 | 沃特世新版生物工艺Walk-Up解决方案发布会
花好月圆,中秋相见 | 沃特世诚邀您参加生物药物分析前沿技术交流会
应用分享 | DESI结合离子淌度可视化天然产物同分异构体空间分布
相关产品
沃特世Xevo G3 QTof四极杆飞行时间质谱
沃特世Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪
搭载ACQUITY Premier的BioAccord LC-MS系统
SELECT SERIES MRT
Arc Premier系统
ACQUITY Premier系统
沃特世Andrew+ Pipetting Robot自动移液机器人
DESI XS
ACQUITY APC超高效聚合物色谱系统
ACQUITY RDa质谱检测器
RADIAN ASAP直接质谱检测器
Arc HPLC系统
Prep SFC 150 AP系统
Waters Xevo TQ-S cronos三重四极杆质谱仪
SYNAPT XS高分辨率质谱仪
关注
拨打电话
留言咨询