其他null检测 | 使用UPLC评估增加柱前系统体积对含有高有机相稀释剂的样品峰形的影响-沃特世科技（上海）有限公司(Waters)

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应用领域	其他
检测样本	其他
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参考标准	USP，药典方法，UPLC，HPLC，Empower，监管，峰对称性

理想情况下，在运行色谱方法时，样品稀释剂组分应尽可能接近方法起始条件。这样做的目的是最大程度减小由样品溶剂效应引起的谱带展宽和峰畸变，进而避免出现峰不对称性、峰分裂或数据不可用的情况。引起溶剂效应原因是稀释剂与流动相之间存在洗脱强度差异。当稀释剂的洗脱强度高于流动相时，峰展宽和峰形异常的情况通常会更加严重1-2。事实上，业内普遍认为，最好是将进样的样品溶解于起始流动相中。然而，给定样品的预处理常常需要将分析物溶解在与流动相组分相差很大的溶剂中。为了避免溶解度问题和峰形不佳的问题，许多方案都要求在预处理过程中挥干样品溶剂，然后将样品复溶于流动相中。然而，这个额外的步骤非常耗时，所需时间往往比HPLC分析的时间还要长1。一般而言，推荐的做法是避免使用比流动相更强的溶剂来溶解样品和标准品。这种做法基于如下假设：强于流动相的进样溶剂会干扰样品在柱头处的吸附，而采用大体积进样时尤其如此2。遗憾的是，这种做法在实践中可行性不佳，因为分析人员往往必须根据样品的溶解度来决定有机溶剂的含量，以确保样品能够完全溶解。对于扩散体积较大的传统LC系统，这种现象带来的问题较少，因为柱前样品/溶剂/流动相混合很充分，可以缓解溶剂效应造成的色谱峰问题。然而，对于现代的低分散U(H)PLC系统，如果以较大体积进样含有高有机相的样品，就会出现问题，并可能导致峰对称性变差或峰分裂。

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配置单

二维ACQUITY UPLC系统
型号：ACQUITY UPLC

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简介

理想情况下，在运行色谱方法时，样品稀释剂组分应尽可能接近方法起始条件。这样做的目的是最大程度减小由样品溶剂效应引起的谱带展宽和峰畸变，进而免出现峰不对称性、峰分裂或数据不可用的情况。引起溶剂效应的原因是稀释剂与流动相之间存在洗脱强度差异。当稀释剂的洗脱强度高于流动相时，峰展宽和峰形异常的情况通常会更加严重1-2。事实上，业内普遍认为，最好是将进样的样品溶解于起始流动相中。然而，给定样品的预处理常常需要将分析物溶解在与流动相组分相差很大的溶剂中。为了避免溶解度问题和峰形不佳的问题，许多方案都要求在预处理过程中挥干样品溶剂，然后将样品复溶于流动相中。然而，这个额外的步骤非常耗时，所需时间往往比HPLC分析的时间还要长1。一般而言，推荐的做法是避免使用比流动相更强的溶剂来溶解样品和标准品。

这种做法基于如下假设：强于流动相的进样溶剂会干扰样品在柱头处的吸附，而采用大体积进样时尤其如此2。遗憾的是，这种做法在实践中可行性不佳，因为分析人员往往必须根据样品的溶解度来决定有机溶剂的含量，以确保样品能够完全溶解。对于扩散体积较大的传统LC系统，这种现象带来的问题较少，因为柱前样品/溶剂/流动相混合很充分，可以缓解溶剂效应造成的色谱峰问题。然而，对于现代的低分散U(H)PLC系统，如果以较大体积进样含有高有机相的样品，就会出现问题，并可能导致峰对称性变差或峰分裂。

结果与讨论

利用50 μL定量环增加柱前体积可显著影响对乙酰氨基酚、伊曲康唑、氟哌啶醇以及氯雷他定的峰形和峰面积%RSD，说明这是在低扩散LC系统上使用高有机相稀释剂时解决峰畸变问题的一个有效策略。

采用该解决方案，需要遵循药典方法参数的客户只需进行合规实验室环境下完全受支持的简单配置更改，就能解决所得数据不理想/不可用的问题。

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文献贡献者

沃特世科技（上海）有限公司(Waters)

钻石会员丨第21年

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