方案摘要
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世界卫生组织及我国饮用水卫生标准(GB 5749-2006)均要求饮用水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫(统称“两虫”)含量不超过1个/10 L。关于传统EPA 1623检测方法,水样的采集和浓缩中使用一次性滤囊,中间含复杂的洗脱程序,免疫磁珠分离回收率低,不仅样品处理的步骤繁杂和繁琐,系统误差过大,两虫回收率不到17%。同时,这项实验还要求操作者具有丰富的经验,由于投入高和难度大,这种方法在行业的推广普及目前仍然阻力重重。 GE医疗生命科学部主张采用便携式真空加压膜过滤、丙酮溶解、密度梯度分离及免疫荧光检测相结合的方法,不仅提高两虫的回收率,简化实验步骤和提高流程效率,还能解决因费用昂贵而让两虫检测难以广泛普及的问题。 那么,这种方法是如何做到的呢?简单说来,就是运用Whatman便携式加压真空过滤器(MD 142),运用真孔孔径的Nuclepore径迹蚀刻膜(1um)进行过滤富集和运用Percoll密度梯度介质离心分离,来大幅度提高两虫的回收率,所得分离产物经在GV050/2抽滤系统上运用Nuclepore径迹蚀刻膜表面回收并进行快速染色,最终在荧光显微镜(或DeltaVision Elite高分辨率显微镜)下观察“两虫”形态和数量。确切的说来,这个方法具有两大优势:一是Whatman便携式可换膜过滤器和真孔滤膜替代一次性滤器,二是密度梯度分离替代免疫磁珠分离法,在提高“两虫”回收率(~50%)的同时,大大降低了检测成本。
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