离子交换柱后衍生法测试人体生理样本中的组氨酸

L-组氨酸（HIS）是一种氨基酸，参与人体的各种生物学机制。研究表明，由于其金属螯合特性，HIS负责血红蛋白和肌红蛋白分子中铁的结合，还负责清除活性氧和氮来源产生的自由基 。作为营养补充剂，它对治疗类风湿性关节炎和贫血很有价值，尤其是对慢性肾衰竭患者。人体生物体液中HIS的水平伴随着营养饮食以及各种疾病，如特应性皮炎、组氨酸血症、过敏等情况发生变化。

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现行的HIS检测方法

现行的HIS检测方法，除流行的反相液相色谱法，离子交换色谱很少使用，但对于分析具有可电离基团的化合物，离子交换色谱是一种极具吸引力的分析技术。

与反相类似物相比，新型离子交换固定相的稳定性具有优势。在 IEC中也可以使用有机溶剂作为流动相，从而拓宽了该技术在快速性和分离效率方面的应用。

但是，IEC 众所周知的缺点包括平衡时间较长、峰更宽和梯度洗脱受限。在柱后衍生化中，反应以“孤立”的形式进行，避免了内源性化合物容易发生副反应，从而影响分析方法的准确性及稳定性的问题。在分析未知基质的复杂生物样品时，没有事先分离的在线衍生化总是容易受到干扰。

因此IEC与柱后衍生仪的结合已被证明是一种强大的分析工具，它融合了两种技术的最佳特性，包括对各种分析物的高分离效率、色谱柱稳定性、简单的样品预处理、自动化以及高灵敏度和选择性。

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Pickering 柱后衍生方案

下述柱后衍生方案基于分析物与OPA在弱碱性介质下的特异性在线反应，无需亲核试剂。通过使用经典的基于非特异性OPA的伯胺化学方法对人体血清和尿液进行代表性分析，证明了所提出的反应在选择性方面的优越特性。

图1：设备连接图示，柱温箱及柱后衍生部分，可以完美与Pickering onyx PCX适配

图2:Representative chromatograms from the analysis of human serum by (A) the proposed HPLC-PCD method and (B) using a non-speciffc PCD reaction (RA = 2 mmol L-1 OPA and RB = 5 mmol L-1 N-acetylcysteine in 100 mmol L-1 borate buffer (pH = 10), λex/λem = 340/460 nm).

图3：Representative chromatograms from the analysis of human urine by (A) the proposed HPLC-PCD method and (B) using a non-speciffc PCD reaction (RA = 2 mmol L-1 OPA and RB = 5 mmol L-1 N-acetylcysteine in 100 mmol L-1 borate buffer (pH = 10),

图4（左图）:Accuracy of the proposed method. 

图5（右图）:Accuracy of the proposed method.

在此案例中邻苯二甲酸酯（OPA）作为最常用的 PCD 衍生化试剂之一，具有独特的特性，例如在环境温度下反应动力学快、试剂成本低、背景信号相对较低等。与氨基酸（包括组氨酸）的“经典”OPA 反应涉及伯氨基与 OPA 在碱性条件下（通常为 pH 10）在亲核试剂存在下反应，产生高荧光衍生物 。

然而，在常见的氨基酸中，在没有亲核试剂的情况下，HIS也通过不同的机制与OPA反应。HIS -柱后衍生的方法有望成为开发高度特异性分析平台的基础，用于测定复杂生物材料中的 HIS及其他氨基酸。

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Pickering柱后衍生仪可完美适配HPLC、UPLC、IEC等色谱设备方法，与任何品牌的任何设备均可联用，且可提供具有参考价值的应用文献，衍生试剂，色谱柱等一系列耗材作为辅助，加速方法开发进程，且结果准确可靠；如想获取上述文献全文，扫描下方二维码：

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参考文献：

Determination of histidine in human serum and urine by cation exchange chromatography coupled to selective on-line post column derivatization，Eirini Stampina a , Apostolia Tsiasioti a , Kalliopi Klimatsaki b , Constantinos K. Zacharis c , Paraskevas D. Tzanavaras a, Journal of Chromatography B，1173 (2021) 122697

Pickering

Pickering是德祥集团资深合作伙伴之一。美国Pickering Laboratories公司是一家全球专业提供人工测试体液和柱后衍生化学试剂、色谱柱、分析方法等柱后衍生分析整体解决方案的机构，其不断创新及良好的信誉被众多的美国政府机构如EPA、ATF、FDA、AOAC和世界著名的厂商所认可。

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