重组蛋白（磷酸酶）离心方案

2023/06/12   下载量： 0 次

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应用领域 医疗/卫生
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重组蛋白质生产的目标是产生高产量的功能性蛋白质。实验成功的重要基础是细胞的培养以及离心（离心是蛋白质分离和纯化的基本技术）。 本应用指南描述了用作概念系统验证的重组人磷酸丝氨酸磷酸酶（hPSP）的生产流程。从Innova® S44i 摇床中细菌培养物的生长开始，使用装载6 L转子的高速离心机（CR30NX 或CR22N），搭配1.5 L 三角离心瓶收获这些培养物。该离心收获套装可辅以“ 锥底管高速沉淀离心套件”（转子含配套的50 mL 锥底管），用于裂解后续的分离操作。结果表明，这种产品组合高效灵活，可为重组蛋白大规模生产工作流程奠定基础。

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重组蛋白的生产是一项基本的生物技术，已应用于研究、医学和工业领域。这些蛋白质由转基因生物所产生。根据蛋白质的类型及其用途，可以使用许多不同的表达系统（例如细菌、酵母、哺乳动物细胞、昆虫细胞）。


如果需要对未知蛋白进行表征（即需要研究其结构和功能），那么需要目标产物的数量会更多。尤其是两个步骤会受此影响：必须扩大细胞培养和收获的规模（数升）。这对用于回收目标产物的仪器设备会提出更高的要求，同时也会导致更高的工作量（如果采用体量较小的设备）。


本应用指南阐述了通过培养和收获细菌以及纯化蛋白质来生产重组蛋白的工作流程。目的是证明使用Innova S44i 摇床和高速落地离心机CR30NX 可以获得高产的功能性重组蛋白。为此，我们使用了离心收获套装，并辅以高速沉淀离心套件。这种搭配可以帮助用户轻松且有效地执行工艺流程的每一个步骤。


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表达系统：

用pET28a 质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），该质粒含有编码带His 标签蛋白的人磷酸丝氨酸磷酸酶（hPSP）基因


培养系统：

使用Innova S44i 摇床（冷冻型，轨道直径2.5 cm）。该恒温摇床容量大，可以高速高效振荡大量培养物。因此，它非常适合以升为规模对培养物进行培养。


离心系统：

高速落地离心机 CR30NX 可与独特的6 L 转子（R9A2 固定角转）组合使用，搭载独特的1.5L 三角瓶，搭配中等体积R19A2 固定角转以及50 mL 锥底管可完成高速离心收获。


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文献贡献者

艾本德中国/Eppendorf China
白金会员 丨 第21年
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