在研磨幼猪内脏组织实验中 你有遇到过这些问题吗?
本期昊诺斯第14期组织研磨和样品处理分享、讨论,我们给大家分享的内容是——研磨幼猪内脏组织测药物代谢,邀请到了昊诺斯销售经理给大家做分享。
那接下来,就让我们先睹为快,看看这个案例的情况。
实验前样品准备
实验:研磨幼猪内脏组织测药物代谢
试验样品:幼猪心、肝、脾、肺、肾、脑6个部位的组织
实验目的:药物代谢测定分析
实验步骤:
1、取出置于冰箱内的幼猪心、肝、脾、肺、肾、脑组织样品略解冻,每个部位的样品各取2份为一组对照,切成小块后分别置于离心管内,编号并放进冰盒中;
2、每次研磨将以对照组为单位进行。以脾脏研磨为例:将2份脾脏组织样品分别转移至2个鼎昊源TL1000小型组织研磨仪配套的硬质塑料研磨管中,每管各加入不锈钢珠1颗,其中一管加入磷酸盐组织液,另一管加入醋酸铵组织液,盖好管盖,安装上机;
3、采用自动间歇研磨方法,组织研磨仪转速适当,设置循环,组织研磨仪研磨完成后用吸管转移回之前对应编号的离心管中;
4、由于各内脏组织样品的韧性不同,针对肝和脑组织的研磨,采用仅一次研磨的方法,使研磨时间被缩短,但组织研磨仪研磨效果仍然很好;针对心脏组织的研磨,采用了鼎昊源TL1000小型组织研磨仪配套的不锈钢研磨罐,使研磨更加匀细。
实验结果:
A.磷酸盐组织液
B.醋酸铵组织液
C.最终结果图
此外,我们的分享嘉宾还跟群内用户进行了激烈的分享、讨论,让我们一同来看看擦出了怎样的火花吧!
昊诺斯嘉宾:大家好,今天本次讨论的主讲在上海展会,所以由我来代述一下。这次的实验样品还是内脏组织,但实验目的是成分的测定。
昊诺斯嘉宾:我记得以前曾经在讨论会中有相似的案例,说明目前做这类研究的实验室还是挺多的。做这类实验的一个共同的特点就是样品都比较新鲜,这和做生物大分子的实验有所不同,样品基本保持了原有的性状,这样有利于代谢产物的收集和测定的准确。
昊诺斯嘉宾:如果看过实验报告的老师会发现,在这6种组织中心肺的研磨是稍微费力一些的,其他组织都是容易处理的,但是这类实验虽然破碎样品难度不大,但要求的单个样本量却比较大,这是为了提取到足够的产物,所以我们在这个实验中,用的都是5ml的研磨管,在处理量上完全满足实验要求。
昊诺斯嘉宾:正如报告中所述,这次实验用了2种缓冲液,磷酸盐的效果好于醋酸盐的,这可能是跟酸性强弱有关,但两种溶液测定成分都是没有问题的。
用户:只是负20℃够吗?发现肌肉类很少用液氮的。
昊诺斯嘉宾:刚才提到了,这次实验的样本基本是新鲜的,-20℃只是暂时保存,就和超市里生鲜区的肉差不多。
用户:也就是说不用冻硬?这倒是我第一次见。
昊诺斯嘉宾:我们和很多老师讨论过,动物类的样本,特别是新鲜的,冻液氮会适得其反。
用户:哦,我只做过植物的。
昊诺斯嘉宾:因为里面的水分太多了,液氮无法使其彻底脱水,反而会结很硬的冰。
用户:嗯,植物会薄很多,表面积比体积比大,去水快。
昊诺斯嘉宾:是,也分情况。前两天碰到一个做苹果的老师,他也是冻液氮,结果一小块苹果冻得跟钢珠似得,反而也不好研磨了,后来干脆直接磨,磨好了。
用户:应该切片,而不是块,或许好些。
昊诺斯嘉宾:对,但这个老师的样品是从-80℃冰箱里直接拿出来的,采集时切的小块,他也是怕温度变化影响结果,所以才又没切又加液氮。
用户:可能是怕氧化。
昊诺斯嘉宾:他做的是DNA,只要不太高的温度都没问题,而且这种从-80℃冰箱里拿出来的样本,目前最多采用的是加缓冲液研磨,特别是动物样品。
用户:加缓冲液是为了保护?
昊诺斯嘉宾:一来有助于保护样本,二来是帮助化冻,还有的好处就是有利于均匀。
用户:嗯,液体容易混合均匀。
用户:这两种缓冲液有何区别?
昊诺斯嘉宾:应该就是成分不同,作用一致。
昊诺斯嘉宾:这次的实验也是这个老师摸索条件的一个过程,总结起来,我认为本次实验最主要的就是使用的研磨管合适。
用户:加液体积比也是摸索吗?
昊诺斯嘉宾:这个是实验方法固定的,按比例来的,就是因为实验的样本体积是固定的,所以才知道用多大的管子,咱们之前说过,研磨的加样体积也是有要求的。
用户:嗯,太稠了转不起来。
昊诺斯嘉宾:太多了阻力又大,所以本次实验的体积刚好在可控范围之内,而且大管子的研磨力度大,像大多数样本本身就比较好磨,用大管子就可以缩短时间,效率更高。
最后,让我们共同期待第13期“组织研磨和样品处理分享、讨论”活动吧!下期,我们不见不散!
温馨提示:
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此外,本群的目的是希望可以给大家提供一个样品处理问题的交流平台,有什么相关问题在群里能够分享和提问答疑……另外我们还能通过这个平台连接用户使用人员和工厂研发人员,看看在这些讨论过程中是否会碰撞出火花来,以为实验室手工的样品处理做出更多更好的自动化的辅助工具或替代仪器备来,更可以为完善我们现有产品的设计打开思路提出建议……
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