第52-63步
徕卡101
组织脱水、透明、浸蜡、包埋
从患者到病理学家，准备样本进行诊断需要细心、经验以及合理的流程。
徕卡特地为大家整理了取材、组织脱水、透明、浸蜡、包埋以及染色等（常规、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，帮助大家更有效、更简单地获得实验方案，避免错误的发生。
步骤五十二
使用精确的时间
?? 正确：在染色程序中的每一步都需要是精确的时间。
?? 错误：步骤时间染色要求是一致的，“如果染色时间有限”有些步骤被跳过，这可能产生不一致的结果。
这些组织是从同一个蜡块切下的相同厚度，使用的是相同的HE方法，只是由不同的工作人员手工染色。结果是：宏观上都可以看到不一致的染色结果。
步骤五十三
定期监测质量
?? 正确：定期进行内参玻片染色，以监控染色质量。
?? 错误：HE染色从不使用内参玻片，在染色出现问题时，很难确认是染色试剂，染色程序或固定不良的原因。
肾组织包括各种嗜酸细胞和保存完好的核组织元素，可以可靠的评估H染色质量。胎盘是另一种有效的阳性对照标本。
步骤五十四
规范化染色条件
?? 正确：优化所有染色步骤：搅拌，洗涤和排水的时间。
?? 错误：搅拌，洗涤和排水的时间不一致。溶剂和试剂迅速被污染。染色效果不一致。
使用自动染色仪的好处之一是搅拌、洗涤和排水时间是一致的。可保证其他变量的可控性，这将确保良好的，一致的染色结果。
步骤五十五
确保彻底脱蜡
?? 正确：玻片脱蜡彻底。
?? 错误：玻片脱蜡有时不完全或玻片包含残留蜡块。可能导致无法染色，或不均匀染色区域。
该HE染色切片显示整个左侧区域和部分几个较小的区域，部分染色或未染色。这是由于前期不完全脱蜡导致。
步骤五十六
定期更新试剂
?? 正确：溶剂和染色剂被定期更换的频率，取决于处理的玻片染色或蜡块的数量。
?? 错误：随机的更换溶剂和染色试剂。直到染色质量下降才会更换试剂。
很差的染色质量，苏木素染色效果很差，该试剂应立即更换。
步骤五十七
彻底水化
?? 正确：玻片在苏木素染色之前需要彻底水化。
?? 错误：苏木素溶液混入酒精或二甲苯，导致不均匀的染色。
该皮肤表皮的苏木素染色不均匀是由于残余的二甲苯（和蜡）引起的。
步骤五十八
苏木素质量监控
?? 正确：因苏木精染色液会逐步被玻片和染色架携带的试剂稀释和继续氧化，故苏木素溶液的性能需要进行仔细的监控。
?? 错误：苏木素染色能力是每天变化的并且无法知道变化规律的。例如，染色缸的表面面积，在染色过程中的通透程度，和周围的温度均可影响氧化速率。
同一蜡块切同样厚度的2张玻片，使用自动染色机，相同的程序，间隔七天H&E染色显示，即使是肉眼观察，染色效果的变化也是十分明显的。
步骤五十九
??正确：苏木精染色后，一般通过 Scott’s碱性自来水或氨水进行彻底的“返蓝”。此方法受当地自来水的自然PH值影响。
?? 错误：有时由于未完全“返蓝”，细胞核会呈现粉红色。细胞核在苏木素未染（过分化）或伊红过染也可能呈现粉红色。
A.表皮细胞核的界限不清并被染成了粉红色。原因是苏木素染色后在碱性水中未恰当的“返蓝”（皮肤HE）。
B.苏木素染色后怡当“返蓝”的核染色效果。这幅图的核拥有更好的边界（皮肤，氢和电子）。
步骤六十
??正确：“返蓝”后的步骤需要非常彻底的清洗，以便去除自来水中残留的碱，以防止其中的碱阻碍后续伊红染色，引起染色淡或染色不均匀。
?? 错误：不完全冲洗“返蓝”（清洗后留下的残余碱）使伊红染色变弱或不均匀。
剩余碱对伊红染色的影响。注意片状染色效果（脾HE）。
步骤六十一
伊红PH监测
?? 正确：对伊红溶液的pH监测。保持最佳染色，保持PH5.0。加入醋酸可便捷的降低pH值。没有刻意监控伊红pH。
?? 错误：当染色强度下降选择替换溶液（碱性自来水的携带带入能引起伊红溶液的pH上升）。
肺组织H&E染色，因伊红染色太弱，而不可接受的染色结果。请注意，只有红细胞部分被伊红染色。
步骤六十二
透明和盖片前需要彻底脱水
?? 正确：放置在二甲苯前需要彻底脱水。
?? 错误：组织有时会经过酒精步骤后进入二甲苯。在有水污染的二甲苯中透明，可能会导致在组织中有微小水滴的存在，该区域在显微镜微观处为看不到细节的不透明区域。
整张玻片缺乏清晰度（肉眼宏观看不岀来）。仔细检查发现整张玻片存在微小的水滴。
步骤六十三
?? 正确：使用前要保证盖玻片是干的，并使用高质量的封固剂。在使用长期贮藏的盖玻片前必须提前确认盖玻片品质，长时间（几个月或几年）的存储可能导致盖玻片质量变差。
?? 错误：在盖玻片盖片前组织只有部分完全干燥，可能造成部分核呈黑色。如果封固剂的选择是基于价格，则该种盖玻片长期储存可能导致封固剂结晶或盖玻片脱落。
A.在盖玻片盖片前组织只有部分完全干燥。这导致了微小气泡被困在核内，使其呈现黑色（有时被称为“玉米片”）。
B.使用储存了六个月的质量差的封固剂封，,H&E玻呈现大量折射球晶。
接下来我们将会为大家带来切片、染色、正常储存试剂等操作流程小贴士，感兴趣的话可以关注我们徕卡101系列，后续我们将会为您奉上更详尽的内容。
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