【飞诺美色谱】畜禽肉中头孢噻呋残留量检测 LC-MS/MS法

艾杰尔飞诺美

2024/04/01 16:25

头孢噻呋(ceftiofur)又名赛得福，是第一个畜禽专用的第三代头孢类广谱抗生素，具有优良的抗菌活性和药动学特点，用于治疗牛、马和猪的呼吸系统疾病。随着头孢噻呋在畜牧业中的广泛使用，不可避免地引起其在动物组织或其产品中的残留。GB/T21314-2007规定了在畜禽肉中头孢噻呋方法检出限为50 µg/kg。

1.样品提取
称取5.00 g(精确到0.01 g)均质好的样品，置于50.0 mL 离心管中，加入15.0 mL 乙腈-水(15:2，v/v)，用均质器均质30 s，洗涤均质器刀头，洗涤液倒回离心管中，在振荡器上振荡1 min，4000 rpm离心5 min，合并上清液于50 mL离心管中，再重复用10 mL乙腈-水(15:2，v/v)洗涤刀头提取一次合并上清液，用乙腈-水(15:2，v/v)定容至40 mL，准确移取20 mL于100 mL鸡心瓶中，35℃旋蒸去除乙腈。

2.净化方法
先将Cleanert® C18 (500mg / 3mL)小柱分别用3.0 mL甲醇、3.0mL水活化平衡；向除去乙腈层的瓶中加入25 mL0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液，涡旋混匀1 min，用0.1 mol/ L NaOH溶液调节pH值为8.5，再以1 mL/min流速过柱；然后用2 mL磷酸盐缓冲液淋洗2次，再用2 mL超纯水淋洗，最后3 mL乙腈洗脱(流速1 mL/min)，洗脱液于45℃氮气吹干。用1 mL 0.01 mol/L乙酸铵溶液(pH=4.5)溶解残留物，过0.22µm滤膜后待测。

3.检测方法

3.1色谱条件
色谱柱：Venusil® ASB C18，
2.1×100 mm，5 µm，150 Å；
流动相：A相-10 mM乙酸铵溶液 (pH=4.5)，B相-乙腈

柱温：35℃；
进样量：5 µL；

梯度洗脱：见表1

表 1 液相色谱梯度洗脱条件

时间(min)	流速 (mL/min)	A/%	B/%
0.00	0.35	98.0	2.0
1.50	0.35	98.0	2.0
3.00	0.35	60.0	40.0
3.01	0.35	10.0	90.0
5.00	0.35	10.0	90.0
5.01	0.35	98.0	2.0
7.00	0.35	98.0	2.0

3.2质谱条件
离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正离子扫描

电喷雾电压：5500 V

雾化气压力：50 psi
气帘气压力：13 psi

辅助气压力：55 psi

离子源温度：550℃
采集方式：多反应监测(MRM)
Q1、Q3均为单位分辨率质谱参数(见表2)

4.实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测头孢噻呋，加标量为50.0 µg/kg加标回收率大于75%，能够满足检测要求。由图1可看出经Cleanert® C18固相萃取柱净化，采用Venusil® ASB C18色谱柱检测得到的头孢噻呋峰形良好，且保留时间稳定。
表 3 头孢噻呋加标回收实验结果 (n=3)

物质名称	加标量/(µg/kg)	处理加标回收率/%	RSD/%	RT/min
头孢噻呋(Ceftiofur)	50.0	77.32	2.80	1.86

图 1 头孢噻呋样品加标 50.0 μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图

结论：
本实验建立了头孢噻呋残留量检测的LC-MS/MS检测方法，并结合固相萃取技术对禽畜类肉中头孢噻呋的残留量进行了测定。对于加标量为50.0 µg/kg的样品进行了检测，回收率大于75%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中的头孢噻呋残留量。

5.订货信息

产品名称	规格包装	订货号
Venusil® ASB C18	5 µm，150 Å，2.1×100 mm	VS951002-0
Cleanert® S C18	500mg / 3mL，50/pk	S185003
保护柱套	适用于4.6×10 mm和2.1×10 mm	SH-100
直联式保护柱芯	5 µm，150 Å，2.1×10 mm	VS950102-0S
1.5 mL样品瓶	短螺纹透明带书写32×11.6 mm，100/pk	1109-0519
1.5 mL样品瓶盖	9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE隔垫，45．Shore A1.0 mm，100/pk	0915-1819
针式过滤器(Nylon)	13 mm，0.22µm，200/pk	AS021320
一次性注射器	2 mL两件式无针头，100/pk	LZSQ-2ML
乙腈UV级	4 L/瓶，色谱纯	015-4
甲醇	4 L/瓶，色谱纯	S230-4

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