摘要 ：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱的方法，建立了辣椒油中罗丹明 B 的检测方法。样品经 20%丙酮的正己烷溶液（V/V）提取，Cleanert Alumina-N 固相萃取柱净化，Venusil MP C18 色谱柱（4.6 × 150 mm，5 µm，100 Å）分离，水和甲醇为流动相进行洗脱，外标法进行定量。结果表明，罗丹明 B 添加量为 0.05 mg/kg 时，回收率在 90% ~ 100%之间，能够满足检测要求。
关键词: 罗丹明 B；Venusil MP C18 色谱柱；Cleanert Alumina-N
前言
罗丹明 B(Rhodamine B)又称玫瑰红 B,或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。经老鼠试验发现，罗丹明 B 会引致皮下组织生肉瘤，被怀疑是致癌物质。罗丹明 B 在溶液中有强烈的荧光，用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。曾经用作食品添加剂，但后来实验证明罗丹明 B 会致癌，现在已不允许用作食品染色。
因此通过有效的实验技术手段，对辣椒油中的有关罗丹明 B 残留进行监控，以确保消费者对辣椒油消费的安全具有重要意义。
本实验通过优化前处理方法建立了罗丹明 B 在辣椒油中的高效液相色谱的检测方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（紫外检测器）；
博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置。
试剂材料
丙酮、甲醇、正己烷为色谱纯；实验用水为超纯水；罗丹明 B 标准品（纯度 99%）；
一次性无菌注射器；Nylon 针式过滤器(0.45 µm，直径 13 mm)；
Cleanert Alumina-N 固相萃取柱：2000 mg/6 mL
样品制备
样品提取
称取 1 g 辣椒油于 40 mL 玻璃瓶中，加入 10 mL 20%丙酮的正己烷溶液（V/V），振荡摇匀后待净化。
样品净化
先将小柱用 6 mL 正己烷活化平衡，然后将待净化液过柱，弃去全部流出液，然后用 10 mL 20%丙酮的正己烷溶液（V/V）进行淋洗，最后用 10 mL 2%氨化甲醇（V/V）洗脱。收集洗脱液于 40℃氮气吹干，用 1 mL 甲醇溶解残留物，过 0.45 µm Nylon 针式过滤器后待测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
实验条件
液相条件
色谱柱：Venusil MP C18，5 µm，100 Å，4.6 × 150 mm
流动相：甲醇︰水=75︰25（V/V）
柱 温：30℃
进样量：20 µL
检测波长：550 nm
结果与讨论
实验结果
由表 1 可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测罗丹明 B，辣椒油基质加标回收率在 90%以上，能够满足标准要求。
表 1.辣椒油中罗丹明 B 加标回收实验结果
结论
本实验建立了辣椒油中罗丹明 B 残留量的检测方法，并结合高效液相色谱对辣椒油中罗丹明 B 的含量进行了测定。对于加标量为 0.05 mg/kg 的辣椒油样品，回收率在90% ~ 100%之间，符合实验要求。
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