摘要：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）建立了大鼠血浆中芬 太尼的前处理方法。样品经缓冲盐溶液提取，Cleanert PEP-2（60 mg/3 mL）固相萃取柱净 化，LC-MS/MS 检测，Bonshell C18 Plus（2.7 µm，3.0 × 50 mm）色谱柱进行分离，外标法 进行定量。结果表明，当加标量为 0.01 µg/mL 时，芬太尼的加标回收率为 91.6%，RSD 小 于 10%，能够满足检测要求。
关键词：大鼠血浆；芬太尼；Cleanert PEP-2；LC-MS/MS；
样品信息
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
AB SCIEX API 4000+高效液相色谱串联质谱仪。
试剂材料
甲醇为色谱纯；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠为分析纯；
磷酸盐提取液：称取 1.70 g 磷酸氢二钠和 12.14 g 磷酸二氢钠，溶解在 800 mL 水中，调节 pH 至 6.0，（若初始 pH 低于 6.0，则用 0.1 mol/L 的磷酸氢二钠 调节 pH 至 6.0，若初始 pH 高于 6.0，则用 0.1 mol/L 的磷酸二氢钠调节 pH 至 6.0。）用水定容至 1 L，混匀；
Cleanert PEP-2（60 mg/3 mL）：PE0603-2；
芬太尼标准溶液：甲醇溶解。
前处理方法
样品提取
取 1 mL 血样，加入 4 mL 磷酸盐提取液，超声提取 10 min，4000 r/min 离心 5 min，转移上清液待净化。
样品净化
将 Cleanert PEP-2 小柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化平衡，将上述待净化 液全部上样于小柱上，弃去流出液，然后用 5 mL 水淋洗小柱，弃去流出液，并 抽干小柱。最后用 5 mL 甲醇洗脱，收集流出液于 35℃氮吹至干，用 50%乙腈水 溶液（v/v）定容至 1 mL，过 0.22 µm 尼龙针式过滤器过滤，待检测。 基质标准工作溶液配制
取高浓度芬太尼标准溶液，用空白样品基质溶液制成 0.01 µg/mL 的基质标 准工作溶液。
色谱条件
色谱柱：Bonshell 2.7 µm C18 Plus，3.0 × 50 mm；（P/N：SPS920503-0）
流动相 A：5 mM 乙酸铵水溶液；
流动相 B：乙腈；
柱温：30℃；
进样量：5 µL；
流速：0.3 mL/min；
质谱条件
离子源：ESI+；电喷雾电压：5500 V；雾化气压力：55 psi；气帘气压力：30 psi；辅助气压力：50 psi；离子源温度：550℃；采集方式：多反应监测(MRM)。
结果与讨论
实验结果
由表 4 可知，采用固相萃取结合 LC-MS/MS 的方法检测大鼠血浆中的芬太 尼，目标物的加标回收率为 91.6%，且 RSD 值小于 10%，能够满足检测要求。 由图 1 ~ 图 4 可知，用 Bonshell C18 Plus 色谱柱检测芬太尼，峰形良好，保留时 间稳定。
实验谱图
结论
本实验建立了大鼠血浆中芬太尼的前处理方法，并结合 LC-MS/MS 对样品 进行了检测。实验表明，对于加标量为 0.01 µg/mL 的加标样品，芬太尼的回收 率为 91.6%， RSD 值均小于 10%，平行性良好，能够满足实验要求。说明 Cleanert PEP-2 可以用于大鼠血浆中芬太尼的前处理。
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