在开发和控制工业化生产重组蛋白的生物过程中,一项基本要素是要提供快速、准确且可靠的过程数据。对动物和细菌细胞培养物中的基质(营养物质)和代谢物进行准确的监控,是避免在发酵过程中营养不足,或有毒代谢终产物积聚的关键。不受控制的代谢物可对细胞生长及存活以及蛋白的质量和产量产生不良影响。因此,精确跟踪发酵过程能确保可重现性,且是优化过程开发和验证的关键。
测试的典型参数
包括葡萄糖、乳酸、谷氨酸、谷氨酰胺、氨、钠和钾。目前,检测基质和代谢物的多参数分析仪系统采用酶膜的生物传感器和离子选择性电极。这些仪器的主要缺点是酶膜随着时间的推移准确度会下降,材料成本高昂,检测结果呈非线性,而且总体灵敏度和准确度较低。
罗氏Cedex Bio生物过程分析仪检测
Cedex Bio生物过程分析仪和最近推出的Cedex Bio HT生物过程分析仪可应用于提升在发酵过程中的过程监控。Cedex Bio HT生物过程分析仪专为过程开发的高通量检测而设计,每小时最高测试数达320。
Cedex Bio HT生物过程分析仪结果与Cedex Bio生物过程分析仪得到的结果完全一致。这项技术采用了罗氏成熟的仪器平台,相比目前使用的其他仪器,在其扩展检测范围内,显著提高了其灵敏度和可重现性(见表)。
Table. Comparison of measurement ranges
Cedex Bio生物过程分析仪配备了自动稀释功能,从而扩展了检测范围,显著降低了操作员人为造成的偏差。在Cedex Bio生物过程分析仪上,样本在上机之前无需人工稀释。各项光度测定(如LDH [乳酸脱氢酶]、IgG [免疫球蛋白])和离子选择性电极(钠,钾)结合于同一台仪器,可对单个样本进行灵活的检测组合。
Figure 1. Accuracy and linearity comparisons for glucose, accuracy and linearity comparisons for lactate, and accuracy and linearity comparisons for glutamine
Cedex Bio生物过程分析仪卓越的数据质量
利用相同的参考标准(参见图1中的血糖、乳酸和谷氨酰胺),将Cedex Bio生物过程分析仪与采用酶膜技术的成熟仪器进行了对比。日间平行对照实验结果表明,Cedex Bio生物过程分析仪具备更佳的准确性和线性。
此外,Cedex Bio生物过程分析仪的高灵敏度使得营养有限的发酵过程成为可能。而且,可检测到发酵过程中代谢物的细微变化。
根据该领域内的相关性研究得到的结果
酶膜分析仪需要进行繁琐的维护、校准和频繁的质控。对于批量饲养哺乳动物细胞的发酵过程而言,Cedex Bio生物过程分析仪相关性研究的数据质量更高(参见图2中的血糖和乳酸),而且表明了Cedex Bio生物过程分析仪能方便地取代酶膜分析仪而不会产生任何负面影响。
Cedex Bio生物过程分析仪能够分析样本的产品质量参数,如LDH(代表释放量[即胞浆蛋白酶])和IgG(滴度),这是一个不可忽视的优势。
Figure 2A. Results of correlative studies—Glucose
总结
Cedex Bio生物过程分析仪在同一个平台上集成了三台设备的功能,可在数分钟内对同一个样本进行多参数测试。自动化稀释功能可减少需依靠操作人员的步骤和减少偏差。方便易用且稳定的光度计测定、离子选择测定和浊度测定既可靠又具备可重现性,且不同地点的多台仪器之间可做直接比较。由此得到的灵敏、精密且准确的分析数据能确保对发酵过程进行高水准的控制。
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