替米考星是什么?
一种畜禽专用大环内酯类抗生素,被广泛应用于治疗和预防牛、羊、和猪等溶血性巴氏杆菌肺炎放线杆菌属胸膜肺炎,支原体和其敏感菌感染引起的肺炎防治中。
农业部958号公告-1-2007中也详细规定了采用高效液相色谱法对牛奶中替米考星残留量测定的方法。
分析方法
该方法用于高效液相分析法针对牛奶中替米考星残留量的测定,其中
Discovery® DSC-18 SPE 用于样品的净化
Discovery® HS C18 色谱柱用于HPLC分析
.牛奶样品净化
SPE柱 | Discovery® DSC-18 SPE, 500 mg/6 ml(52604-U) |
样品制备 | 取牛奶5 mL于离心管中,加入乙腈15 mL,涡旋混合30s,超声1 min,以6000 r/min离心5 min,将上清液转入150 mL锥形瓶中,加水50 mL稀释,备用 |
1.平衡 | 依次用10 mL甲醇和10 mL水活化 |
2.上样 | 取2 mL样品溶液上柱 |
3.洗脱 | 依次用10 mL水和10 mL乙腈洗涤 |
4.收集 | 用5 mL洗脱液(制备方法:称取乙酸铵7.71 g溶解于甲醇200 mL中,加入乙腈790 mL,冷却至室温,用乙腈稀释至1000 mL)收集 |
后处理 | 氮气吹干,用流动相1 mL溶解残留物,0.22 μm滤膜过滤后,供高效液相色谱分析 |
2.分析条件
3.样品图谱
空白溶液色谱图
样品溶液色谱图
加标样品色谱图
4.数据结果
标准品数据
化合物 | 保留时间(min) | 分离度 | 塔板数(USP) | 拖尾因子 | |
1 | 替米考星反式异构体 | 5.7 | / | 6779 | 0.85 |
2 | 替米考星顺式异构体 | 6.6 | 3.07 | 7086 | 0.85 |
专属性考察
峰编号 | 化合物 | 保留时间(min) | 相对 峰面积% | 相对 保留时间 | 拖尾因子 |
1 | 替米考星反式异构体 | 5.7 | 10.3 | 0.86 | 0.93 |
2 | 替米考星顺式异构体 | 6.6 | 89.7 | 1.00 | 0.93 |
重现性考察(替米考星,0.5 ug/mL)
样品名称 | 峰面积 |
Std 1 | 22.4 |
Std 2 | 23.0 |
Std 3 | 23.1 |
Std 4 | 23.6 |
Std 5 | 22.9 |
Mean | 23.0 |
Standard deviation | 0.4 |
RSD (%) | 1.9 |
SPE回收率(替米考星加标量,0.2 mg/kg)
样品名称 | 回收率% |
Sample 1 | 102.3 |
Sample 2 | 98.7 |
Sample 3 | 99.7 |
Mean | 100.2 |
Standard deviation | 1.85 |
RSD (%) | 0.1 |
浓度校正曲线
浓度(ug/mL) | 平均峰面积 |
0.025 | 0.85 |
0.05 | 2.12 |
0.1 | 3.81 |
0.25 | 8.43 |
0.5 | 22.4 |
1.0 | 42.7 |
2.0 | 91.6 |
50.0 | 1117 |
5.结论
在牛奶中添加浓度为0.2 mg/kg的替米考星,回收率在99.7%~102.3%。该方法的检出限和定量限分别为3.9和11.9 μg/L,其中方法定量限低于国家农业部标准中的要求5 μg/L,表明该方法可作为牛奶中替米考星残留量测定的分析方法。
相关产品 | 货号 |
Discovery® HS C18 15 cm x 4.6 mm, 5 μm | 568522-U |
Discovery® DSC-18 SPE, 500 mg/6 ml | 52604-U |
甲醇, 梯度级别 for liquid chromatography LiChrosolv® | 1.06007 |
乙腈, 梯度级别for liquid chromatography LiChrosolv® | 1.00030 |
四氢呋喃, 梯度级别 for liquid chromatography LiChrosolv® | 1.08101 |
正磷酸, for analysis EMSURE® ACS, ISO, Reag. Ph Eur | 1.00573 |
醋酸铵, for analysis EMSURE® ACS,Reag. Ph Eur | 1.01116 |
二丁胺, ≥99.5% | 471232 |
Discovery® HS C18 高效液相色谱柱 5 μm particle size, L × I.D. 15 cm × 4.6 mm (sigmaaldrich.cn)
Discovery ® DSC-18 SPE 小柱 bed wt. 500 mg, volume 6 mL, pk of 30 (sigmaaldrich.cn)
甲醇 gradient grade for liquid chromatography LiChrosolv® Reag. Ph Eur | 67-56-1 (sigmaaldrich.cn)
乙腈 gradient grade for liquid chromatography LiChrosolv® Reag. Ph Eur | 75-05-8 (sigmaaldrich.cn)
四氢呋喃 for liquid chromatography LiChrosolv® | 109-99-9 (sigmaaldrich.cn)
85%正磷酸 for analysis EMSURE® ACS,ISO,Reag. Ph Eur | 7664-38-2 (sigmaaldrich.cn)
乙酸铵 for analysis EMSURE® ACS,Reag. Ph Eur | 631-61-8 (sigmaaldrich.cn)
二丁胺 ≥99.5% | 111-92-2 (sigmaaldrich.cn)
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