核酸碱基、核苷和核苷酸的HPLC分析
核苷是由含氮碱基与核糖或脱氧核糖缩合而成,核苷与磷酸合成核苷酸。核苷酸主要参与构成核酸,在人体内广泛分布,具有多种生物学功能,如与能量代谢有关的三磷酸腺苷(ATP)、脱氢辅酶等。
为满足不同物质的分离要求,菲罗门推荐多款色谱柱对其进行HPLC分析。
一、 核苷异构体的分离
1.β-胸苷(dT)与α-胸苷的分离
ACE C18-AR是一种独特的C18键合的HPLC色谱柱,结合了C18烷基链的疏水作用和苯基的芳香选择性,而且可以耐100%水相,非常适合芳香化合物的分离。
色谱条件:
色谱柱ACE Excel C18-AR 5μ 150 × 4.6 mm
货号:EXL-129-1546U
ACE C18-Amide是一款嵌入极性酰胺基团的C18柱,相当于同时具备C18与酰胺基的选择性,同样耐100%水相,很适合分析含氢键给体的物质。
色谱柱:ACE Excel C18-Amide 3μ 100 X 4.6 mm
货号:EXL-1112-1046U
ACE HILIC-N是ACE三款亲水作用色谱柱中的中性柱,相对于阴阳离子都显示出较低的离子交换能力,通过极性相互作用、吸附和一定程度的分散(分配能力)来保留分离核酸碱基、核糖核苷和脱氧核糖核苷。
色谱柱:ACE HILIC-N 5μ 150 X 4.6 mm
货号:HILN-5-1546U
三、 核酸碱基、核苷和核苷酸的分析
Titank C18有机硅胶杂化色谱柱,是在硅胶的硅氧网状构造中以更加稳定的烷基来取代在碱性条件下不稳定的硅氧桥连接,具有宽pH耐受范围(1-12)、低背压和100%水相稳定的特点,对于较大极性的物质有很好的保留。
色谱柱:菲罗门 Titank C18 3μ 50 × 3.0mm
货号:FMB-5559-YONU
ACE NH2是氨丙基键合的硅胶柱,与ACE其它固定相的色谱柱一样,都是采用超惰性的硅胶制成,具有很好的稳定性和使用寿命。
色谱柱:ACE Excel 3μ NH2
货号:EXL-1114-1546U
五、 九种核苷酸的分离
Comixshell AIRP是阳离子嵌入烷基键合的核壳硅胶柱,同时具有反相和阴离子交换选择性,是Comix系列色谱柱中的一种。
Comix系列色谱柱可以用来同时检测无机和有机化合物、分离大极性物质及复杂体系。
色谱柱:菲罗门 Comixshell AIRP 2.7μ 150 × 4.6 mm
货号:FMF-AIRP-EONU
总之,不同的疏水性或是极性作用力的固定相可以提供不同的选择性,所以选择正确的固定相是至关重要的第一步。
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