导致色谱峰异常的可能原因

    常见引起色谱峰异常的因素有:

     1.色谱柱连接管路不正确;
     2.连接件卡进柱子后客户的处理;
     3.HPLC常用色谱柱接头;
     4.色谱柱活化不到位;
     5.不同品质试验用水导致鬼峰;
     6.柱温的应用

     色谱柱连接管路不正确:


      连接件卡住后客户的处理:

      HPLC常用色谱柱接头:

               样品:
               1.苯丙氨酸     2.5-苯基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸
               3.Asp-Phe      4.天冬甜素

 

色谱柱活化不到位:

新色谱柱和长时间不适用的色谱柱都建议活化

活化的重要性

1)运输或储存过程中不可避免干涸掉的填料尽可能尽可能的浸润,使填料恢复活性;
2)不同品牌溶剂之间的差异,可能引起噪音增加,漂移增大,尽可能的置换掉保存溶剂;
3)加大进样量或者连续多次进样的方式,屏蔽掉系统和柱子的活性点,避免对样品峰形产生影响。

活化的注意事项:

1)柱子中的保存液体与使用的流动相之间要互溶,如果不溶请使用中介流动相(异丙醇,或4-二噁烷等),由于中介流动相黏度大,请使用低流速;
2)使用厂家推荐的活化程序;

活化推荐步骤:

反相柱(流速:0.5ml/min,每个步骤时间:120min):
100%甲醇(或乙腈)—60%甲醇(或乙腈)—20%甲醇(或乙腈)——60%甲醇(或乙腈)—100%甲醇(或乙腈)
正相柱(流速:0.5ml/min,每个步骤时间:120min)::100%甲醇(或乙腈):
正相条件使用:
正己烷—流动相
反相条件使用:
异丙醇—乙腈—60%乙腈
H型强阳离子交换磺化交联苯乙烯-二乙烯基笨共聚填充剂:
PH=2.5硫酸水溶液,85℃,0.5ml/min,12小时以上。

不同品质实验用水导致鬼峰:
 


 

 

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