方案摘要
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如何运用BLS细胞融合仪及胚胎聚集针创建胚胎 注射器内吸入培养基，在35mm组织培养板上微滴（大致直径3mm）点样成若干行（列）。向培养板内小心注入石蜡油使其覆盖整板，注意不要使石蜡油直接倾倒在微滴上。石蜡油很容易越过这些微滴。石蜡油的量要完全覆盖这些微滴。使用配件按照说明操作，制作凹陷。 37度，5%CO2条件下孵育培养板几小时，目的是让培养基在液滴内达到平衡。这一步可以在形成凹陷的步骤之前进行。 实验前准备好待聚集的细胞，组织或胚胎，不要将它们长时间暴露在室温下或脱离最适培养条件时间过长。通过在组织培养板盖上加入几滴M2培养基和Tyrode’s酸溶液来去除卵透明带。将组织培养板的培养区域表面如此处理后，胚胎将本能的黏附在表面—因此我们需要使用盖。确认所有培养基溶液和酸液都接近室温。将胚胎放置在一滴M2培养基上。取尽可能少的内含10-20个胚胎的培养基，并移到一滴酸液上。重复这个步骤并将胚胎移到新的一滴酸液上。让胚胎在吸头内保持上下移动，观察卵透明带是如何溶解的。迅速将胚胎移入M2培养基。用几滴培养基溶液洗涤并移入刚才制成的凹陷中。 胚胎培养条件是聚集产量的一个重要因素，因为胚胎要培养过夜，如果是四倍体胚胎在移入母体前需要培养48小时。在培养的每个细节都必须小心操作控制。这包括温度，大气，培养基，室温操作时间及矿物油质量。
文献贡献者
利用四倍体胚胎补偿法制备 ES 小鼠的技术方法
荧光定量PCR应用领域
不经显微操作进行体细胞克隆(徒手克隆)
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