超微量测蛋白的这几个问题，你遇到过吗？

上海元析仪器有限公司

2022/03/16 16:32

超微量分光光度计作为生命科学实验室的常规仪器，在蛋白质组学和基因组学领域发挥着重要的作用。超微量分光光度计最主要的功能是核酸和蛋白质的测定，尤其比色法测蛋白，会出现不同方法所得到的检测结果不相一致的现象。下面我们一起来盘一盘那些超微量分光光度计测蛋白质的相关问题。　

一、直接法测试蛋白质时，发现读数漂移

Warburg公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%，表明结果非常稳定。

二、各种比色法测出的结果并不一致

由于各种方法反应的基团以及显色基团不一，所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。即使是测定同一样品，同一种比色法选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质，以BSA作标准品，浓度1.34mg/mL，以a球蛋白作标准品，浓度2.64mg/mL。因此，在选择比色法之前，可参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。

三、比色法定量蛋白质，样品的吸光值太低导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大

比色法定量蛋白质关键问题是，反应后的颜色是有一定的半衰期，所以每种比色法都列出了反应测试时间，所有的样品(包括标准样品)，都必须在此时间内测试。时间过长，得到的吸光值变小，换算的浓度值降低。除此，反应温度、溶液pH值等都是影响实验的重要原因。此外，

此外，塑料比色皿的使用可以避免石英或者玻璃材质的比色杯，因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色，导致样品吸光值不准确带来的问题。

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