范围
本标准规定了水产品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基异噁唑残留量的液相色谱测定方法。
本标准适用于水产品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基异噁唑残留量的测定,其它磺胺类药物的测定可以参照本标准。
规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的Z新版本。凡是不注日期的引用文件,其z新版本适用于本标准。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
原理
用乙酸乙酯提取,稀盐酸反提取,正己烷脱脂,荧光胺衍生,反相色谱柱分离,荧光检测器检测,磺胺5-甲氧嘧啶为内标物,内标法定量。
试剂
本标准所用试剂在磺胺类药物出峰处应无干扰峰,实验用水应符合GB/T6682中一级水标准。
标准品:磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基异噁唑,磺胺5-甲氧嘧啶,纯度均大于98.0%。
丙酮:色谱纯。
正己烷:色谱纯。
乙酸乙酯:色谱纯。
乙腈:色谱纯。
甲醇:色谱纯。
荧光胺:纯度大于99.0%。
乙酸钠:分析纯。
冰乙酸:优级纯。
盐酸溶液:2mol/L,量取180mL盐酸,加适量水并稀释至1000mL。
乙酸钠溶液:3.5mol/L,称取28.7g无水乙酸钠溶于蒸馏水中,定容至100mL。
荧光胺溶液:2mg/L,称取0.03g荧光胺,加15mL丙酮,振摇至完全溶解,存放在暗处。现配现用。
标准储备液:100mg/L,称取标准品10mg(称准至0.1mg),用甲醇溶解并定容至100mL。避光冷藏保存,保存期为一个月。
混合标准中间液:1mg/L,移取标准储备液各1.00mL,用甲醇稀释并定容至100mL,在室温下混匀。
内标储备液:100mg/L,称取磺胺5-甲氧嘧啶标准品10mg(称准至0.1mg),用甲醇溶解并定容至100mL。避光冷藏保存,保存期为一个月。
内标中间液:1mg/L,移取内标储备液1.00mL,用甲醇稀释并定容至100mL,在室温下混匀。
混合标准使用液:取混合标准中间液20μL、40μL、100μL、200μL、400μL,分别加入内标中间液100μL,用2mol/L盐酸(4.10)稀释至2mL,配成浓度分别为0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L的混合标准使用液,其中内标浓度为0.05mg/L。
仪器与设备
液相色谱仪:配荧光检测器。
电子天平:感量0.0001g。
电子天平:感量0.01g。
高速组织捣碎机。
均质机。
离心机。
旋涡混匀器。
氮吹仪。
往复式振荡器。
聚丙烯离心管:15mL、50mL。
容量瓶:10mL、20mL、50mL、100mL、200mL、500mL、1000mL。
玻璃移液管:1mL、2mL、5mL、10mL。
巴斯德吸管。
色谱条件
色谱柱:ODS-C18,5μm,4.6mm×250mm,或同类型号色谱柱。
柱温:45℃。
流动相:乙腈 乙酸溶液(38 62),500mL水中加入冰乙酸调节pH至3.0配制成乙酸溶液。
流速:1mL/min
进样量:20μL。
激发波长:405nm。
发射波长:495nm。
步骤分析
样品制备
从原始样品中取出部分有代表性的样品,高速组织捣碎机捣碎。四分法缩分出不少于500g样品,混匀,均分成两份。装入清洁容器,加封,标明标记。-18℃以下冷冻保存。
提取
将样品解冻,称取2.00g,置于50mL聚丙烯离心管,加入磺胺5-甲氧嘧啶标准中间液(4.16)100μL,用玻璃棒搅匀,再加乙酸乙酯10mL,均质机14000rpm均质1min,往复式振荡器振动10min,3000rpm离心10min,将乙酸乙酯层小心转移到15mL具塞刻度试管中,40℃以下氮气吹至2mL。再向原离心管中加入乙酸乙酯10mL,旋涡混匀30s,振动10min,3000rpm离心10min,将乙酸乙酯层小心转移到原15mL具塞刻度试管中,40℃以下氮气吹至5mL。然后在试管中加入2.00mL2mol/L的盐酸溶液,旋涡混匀1min,加盖后振动10min,3000rpm离心8min,用巴斯德吸管移去乙酸乙酯层,在余液中加入正己烷5mL,旋涡混匀30s,3000rpm离心8min,用巴斯德吸管移去正己烷层,0.45μm微孔滤膜过滤,滤液备用。
衍生
向样品瓶中加入200μL混合标准使用液或样品提取液、200μL乙酸钠溶液和80μL荧光胺溶液,旋涡混匀30s,20min后供液相色谱分析。
色谱分析
取衍生后的样品提取液20μL进样,记录峰面积,响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据标准样品的保留时间定性,内标法定量。磺胺类药物色谱分析图参见附录A。
工作曲线
称取空白样品2.00g,分别添加混合标准中间液(4.14)20μL、40μL、100μL、200μL、400μL,样品中每种磺胺残留量分别为0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.05mg/kg、0.10mg/kg、0.20mg/kg,按7.2、7.3、7.4操作,以磺胺峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标,磺胺含量为横坐标,绘制工作曲线。
计算
用色谱数据处理软件或按下式计算样品中磺胺残留量:
式中:
X——样品中磺胺残留量,单位为毫克每千克(mg/kg);
s——样品溶液中磺胺峰面积,单位为counts;
s1——样品溶液中内标峰面积,单位为counts;
S——标准溶液中磺胺峰面积,单位为counts;
S1——标准溶液中内标峰面积,单位为counts;
x——加标样品中磺胺残留量,单位为毫克每千克(mg/kg)。
方法回收率
浓度范围为0.010mg/kg~0.10mg/kg时,回收率见回收率表。
回收率表
名称
回收率
磺胺嘧啶
88.0%~111.8%
磺胺甲基嘧啶
90.0%~110.8%
磺胺二甲基嘧啶
91.0%~110.1%
磺胺甲基异噁唑
107.0%~116.7%
方法检出限
本方法检出限为0.010mg/kg。
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的JUE对差值不得超过算术平均值的15%。
果蔬农药残留注意事项
食品检测样品的注意事项
面粉中滑石粉的检测方法
pH缓冲溶液、缓冲指数和缓冲容量
相关产品
ZYD-NP系列多通道农药残留检测仪
ST-1/CLC余氯测定仪--促销中
ZYD-HF手持式水质检测仪--促销中
ZYD-NB便携式农药残留快速检测仪--促销中
智云达农药残留快速检测仪ZYD-NP
ZYD-TF土壤肥料快速检测仪-12通道
ZYD-SC96兽药残留快速检测仪--智云达
ZYD-TF土壤化肥快速检测仪-12通道
ZYD-NP 农药残毒快速检测仪-12通道
ZYD-NB便携式农药残毒快速测定仪(10通道)
智云达微生物检测箱采样箱微生物速测箱ZYD-WSW2
ZYD-NP多通道农药残留检测仪18通道
TCO-2000地沟油快速检测仪
智云达LumDetect-I(B)ATP 荧光检测仪
FJ-DGY-10地沟劣质油快速筛查试剂盒
关注
拨打电话
留言咨询