雷根斯堡大学免疫学研究所使用StrataQuest开发类器官研究新工具

类器官是一种能够模拟特定组织结构和功能的三维细胞培养系统,具有广泛的生物医学应用价值。然而,传统的类器官培养缺乏与邻近组织的微环境相互作用,特别是免疫细胞的影响,这可能限制了类器官在机制研究方面的潜力。因此,将类器官与免疫细胞共培养是一种有效的方法,可以模拟类器官在体内的复杂情境,探索免疫细胞对类器官发育和功能的调节作用。

今日,雷根斯堡大学免疫学研究所 Uwe Ritter教授团队,在Frontiers in Medicine上发表了题为“Analysis of organoid and immune cell co-cultures by machine learning-empowered image cytometry”的文章,以胆管上皮类器官(ECO)和极化的人类效应T细胞为实验模型,建立了类器官和免疫细胞的共培养系统,并用所开发的成像分析平台进行了类器官的检测和定量。作者发现,T细胞对ECO的生长和形态有显著的影响,而生长因子EGF也可以调节ECO的发育。这些结果表明,类器官和免疫细胞共培养可以用于研究类器官和免疫细胞之间的相互作用和信号传导,为疾病机制和药物筛选等领域提供了一个有价值的平台。

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类器官和免疫细胞共培养的一个主要技术难题是如何准确地检测和定量类器官的数量、大小和形态等参数,因为共培养中的免疫细胞会干扰类器官的成像和分析。目前已有的一些软件工具或算法主要针对单纯的类器官培养,不能有效地区分类器官和免疫细胞的边界和内部区域。

实验部分

鉴于多年沉浸于此项研究,文章作者为了读者获得更好的科研技术体验,比较了不同的软件工具或算法(如Incucyte®和OrganoSeg)在不同复杂度的类器官-免疫细胞共培养图像中的表现,发现它们都存在假阳性或假阴性的问题,不能准确地识别类器官结构。在这部分研究中,作者通过优化图像处理和分类器训练的步骤,提高了类器官检测的精度和召回率,但仍然无法满足需求。

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Figrure 1.免疫细胞培养物种类器官定量。

A.不同科学家进行手动计数

B-D.不同复杂程度的自动分析

比较了Incucyte®和OrganoSeg两种软件,数据表明在共培养条件下正确识别器官的能力有限


为了解决这一问题,作者借助于 StrataQuest 基match于机器学习的match图像分析平台,成功构建了一个专门用于类器官与免疫细胞精准定量分析的应用:Organoid App。这个App通过自动成像技术和先进的图像处理工具,基于机器学习算法,能够在密集的免疫细胞共培养中准确地识别类器官,并提取相关的参数,如数量、大小和形状,并实现灰度转换、对比度增强、膜检测和结构分离等辅助方法,更精准对类器官样本进行识别,可以用于高通量的检测和分析类器官和免疫细胞的共培养系统。

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Figure 2.使用StrataQuest构建类器官分析平台

StrataQuest软件是TissueGnostics公司顶级的组织原位单细胞定量分析工具,也是Tissue Cytometry技术的重要组成部分。文中用到的所有算法,包含机器学习、深度神经识别网络算法、结构辅助分离等,也可方便快捷的用于其他研究领域的应用。

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Figure 3. 使用StrataQuest Organoid App进行类器官识别并进行质控。验证了类器官检测计数与面积测定等数据,与手动人工测量结果表现出了高度相关性。

Figure 4. 对比不同分析软件, StrataQuest Organoid App能够更好的识别类器官轮廓

文中借助Tissue Cytometry技术主要研究的内容包括:
T细胞的极化状态对类器官的生长和形态有显著的影响:作者发现,与未极化的T细胞相比,Th1和Th17细胞能够显著地抑制类器官的生长,而Treg细胞则能够促进类器官的生长。此外,Th1和Th17细胞还能够改变类器官的形态,使其变得更加扁平和不规则,而Treg细胞则能够维持类器官的球形和光滑。
EGF对类器官的发育和功能有重要的调节作用:作者发现,EGF能够显著地促进类器官的生长和分化,增加类器官的大小和密度,以及表达特异性的标记物。EGF还能够抵消T细胞对器官样体的抑制作用,恢复类器官的形态和功能。
类器官和免疫细胞之间存在动态的相互作用和信号传导:作者发现,器官样体和免疫细胞之间不仅有物理上的接触和迁移,还有化学上的分泌和受体。例如,器官样体能够分泌IL-6和IL-8等细胞因子,诱导T细胞的极化和活化;而T细胞能够表达EGFR等受体,响应器官样体的EGF信号。这些相互作用和信号传导在不同的时间点和条件下有不同的强度和模式,反映了器官样体和免疫细胞之间的复杂的互惠关系。



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