如何方便高效的实现原代心肌细胞转染

广州市华粤行仪器有限公司

2013/05/13 13:19

NEPA21 贴壁细胞原位电转染无需昂贵的辅助试剂病毒？NO！

原代培养的心肌细胞作为一种主要的研究模型，被广泛应用于心血管研究之中。但如何实现原代心肌细胞的安全高效基因转染，一直是困扰相关科研工作者的难题。常用的阳离子脂质体法，效率极低；无奈借助于病毒系统，而尽管病毒法提高了转染效率，但病毒载体的构建没那么简单，需要花费大量的时间和成本，而且也不能不考虑其安全隐患。

另外，传统的电穿孔法，对原代细胞转染的效率低，细胞难存活。且对于终末分化的原代细胞，如原代心肌细胞、原代神经元等在体外不能分裂增殖，一旦从活体组织中分离出来贴壁培养，便不可消化传代，也就无法实现悬浮状态的电转染。针对这种情况，NEPA GENE公司基于其创始人二十几年的电转染、电融合使用和研发经验，推出了新一代全能型的NEPA21高效基因电转染系统，其全新设计的电转程序，配特有的贴壁转染电极，可实现普通培养板中贴壁细胞的原位转染，特别适用于原代心肌细胞、神经元等的转染。

细胞：鼠原代心肌细胞（rat ventricular myocytes) 贴壁培养24h电转

40 hrs after electroporation (50X）

附：NEPA21贴壁电转Protocol（以鼠原代心肌细胞为例）

1. 细胞分离培养：取乳鼠心室，以酶消化法分离细胞，差速贴壁纯化，将细胞铺于常规24孔板中（用于电转时，细胞接种密度需稍高于普通培养的接种密度），培养1-3d左右。

2. 换液：待细胞贴壁生长，细胞形态较伸展时，用Opti-MEM换液，清洗去除残留血清；加入质粒DNA或合成的RNA，准备电转。

3. 电转染：按照NEPA21设计好的电转参数（电压、脉冲时间、脉冲次数等），执行电转。

4. 电转后，换成正常培养基进行培养；之后观察转染效果，进行后续实验检测。

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