【华粤行】胚胎干细胞(ESCs）高效转染的一个有利工具

广州市华粤行仪器有限公司

2013/05/08 18:39

NEPA21 简便高效无需昂贵的试剂辅助病毒? NO！

如何简便高效地将DNA、RNA导入（小鼠、人、猪等）胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESCs）？一直是令众多干细胞研究人员头疼的难题。常用的脂质体法，对于原代细胞和干细胞的转染几乎难以奏效；而尽管病毒法提高了转染效率，但病毒载体的构建也不那么简单，需要花费大量的时间和成本，而且也不能不考虑安全隐患问题。

NEPA GENE推出的新一代全能型的NEPA21高效基因电转染系统，采用全新设计的电转程序，特别适用于胚胎干细胞、原代细胞等难转染细胞。

细胞：R1小鼠胚胎干细胞悬浮电转后约48h（100X）

附：NEPA21悬浮电转Protocol （以R1小鼠胚胎干细胞为例）

1. ES细胞培养：正常有饲养层（MEF）培养 3天左右，细胞处于对数增长期，活力旺盛。

2. 收集细胞：胰酶消化收集细胞，吹散为单细胞悬液，Opti-MEM清洗去除血清和双抗。

3. 电转染：细胞与质粒DNA混匀于Opti-MEM中，分装到电极杯中，按照设计好的电转参数（电压、方波脉冲时间、脉冲次数等）执行电转。

4. 电转后，ES铺板于MEF

饲养层上正常培养。之后观察电转结果，后续检测或筛选稳定转染细胞株。

如您正面临原代细胞、干细胞、免疫细胞等难转染问题，如对您现在的转染实验不满意，请联系我们！

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