CMCC(B)26001

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品牌: 高科恒辉
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货号: CMCC(B)26001
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北京高科恒辉技术发展有限公司
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微生物检测冻干质控菌种使用说明书

1、复苏菌种前应准备适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备,所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。

2、启开菌种前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在无菌条件下,打开西林瓶,加入0.3mL左右的配套液体培养基,用无菌滴管反复吹吸,将冻干菌种溶解成为悬液,然后用无菌滴管或接种环移至斜面、平板或液体培养基,并连同剩余菌悬液的西林瓶一起放置于36℃培养箱中进行培养。

3、次日观察菌种的生长情况,如未生长,应继续培养24h,或吸取培养之后的西林瓶剩余菌悬液再次接种培养基,培养24h观察。4菌株为一次性使用品,开启之后不能反复使用或保存,暂不开启的菌种应在4℃保藏。5复苏后的菌种在传1-2代后使用,建议菌种使用5代后弃用。

培养基、培养条件和保存方法

方法1:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入脑心浸液培养基,充分悬浮后取适量的菌悬液于营养琼脂(022020)斜面上35-37℃划线培养24-48h。斜面(第一代)放于4℃冰箱保存,每个月转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法2
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入脑心浸液培养基,充分悬浮后取适量的菌悬液于营养琼脂(022020)斜面上划线35-37℃培养24-48h。斜面(第一代)放于25℃下保存,每个月转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法3
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入脑心浸液培养基,充分悬浮后取适量的菌悬液于血平板(024070)后涂布,35-37℃培养24-48h。平板(第一代)放于4℃冰箱保存,并用封口膜或其它封条密封平板,每半个月转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法4
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入脑心浸液培养基,充分悬浮后取适量的菌悬液于胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE)(026020)斜面上35-37℃培养24-48h。斜面(第一代)放于4℃冰箱保存,每个月转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法5
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入脑心浸液培养基,充分悬浮后取适量的菌悬液于疱肉牛肉粒肉汤(027140)加液体石蜡1cm,35-37℃培养48-72h。肉汤(第一代)放于4℃冰箱环境下保存,每半个月转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法6
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入碱性蛋白胨水,充分悬浮后取适量的菌悬液于碱性琼脂(025040)斜面上35-37℃培养24-48h。斜面(第一代)放于25℃下保存,每个月转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法7
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入3%NaCl碱性蛋白胨水,充分悬浮后放置于36℃下复苏8-12小时。取适量的菌悬液于3%NaCl营养琼脂(营养琼脂(022020)加入2.5gNaCl/100mL)斜面上35-37℃培养24-48h。斜面(第一代)放于25℃下保存,每个月转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法8
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入沙氏液体培养基,充分悬浮后取适量的菌悬液于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)(021050)斜面25-28℃培养2-5天。斜面(第一代)放于4℃冰箱保存,每两个月转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法9
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入布氏肉汤,充分悬浮后取适量的菌悬液于血平板(024070)42±1℃微需氧条件下培养48-72h。平板(第一代)放于4℃冰箱微需氧环境下保存,并用封口膜或其它封条密封平板,每个星期转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法10
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入TPY肉汤,充分悬浮后取适量的菌悬液于BBL琼脂(027330)斜面厌氧环境下35-37℃培养48h-72h。斜面(第一代)放于4℃冰箱厌氧环境下保存,每个星期转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应销毁。

方法11
:无菌条件下,用无菌吸管往西林瓶冻干粉中加入脱脂奶粉溶液,充分悬浮后取适量的菌悬液于脱脂奶粉溶液(10%)35-37℃培养48h-72h。菌种(第一代)放于4℃冰箱保存,每两个星期转接一次,代数以此类推,建议使用菌种代数不超过5代,5代后菌种应消毁。

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