目的:
试验不同样品量、不同研磨钢珠大小和不同研磨钢珠数量对新鲜麦苗研磨效果的影响,从而摸索出用TL2020实验室小型植物粉碎机进行小麦麦苗样品前处理的最佳实验方案,为后续有效提取麦苗DNA提供保障。
材料:新鲜小麦麦苗
仪器:主机,TL2020实验室小型植物粉碎机(又名TL2020高通量组织研磨仪,原理是水平震荡驱动样品管内的钢珠使其与管壁或者样品发生高频碰撞摩擦从而实现样品研磨,和刀片粉碎原理的植物粉碎机相比,更适合需要精细研磨的生物及化学实验);配件:2ml研磨适配架,直径1-8mm研磨钢珠
步骤:
1)取样:用打孔器在麦苗上取样20-30片,或用剪刀将麦苗剪成若干小块;
2)将小块/小片麦苗放入一系列2ml EP管中(圆底),部分EP管中放入约0.1g, 部分EP管中放入约1g。其中,在0.1g样品管里分别置入直径4-8mm的钢珠(4mm2-3颗/管,5mm1颗/管,8mm1颗/管);而1g样品管中置入1-3颗4mm的钢球(此时》5mm直径钢球会造成管内拥挤,必然影响研磨效果,故不尝试);
3)将以上EP管同时放入TL2020实验室小型植物粉碎机的2ml研磨适配架中,然后将适配架固定在研磨仪的摇臂中;
4)设置TL2020的研磨时间为5分钟,研磨频率1800rpm(1800次/分钟)。
结果:
图1:当样品量过多时(>0.15g),无论置入1个,2个还是3个直径4mm的钢珠,其研磨效果均不理想,有较多块状组织。 | 图2:当每个试管的样品量为《0.1g左右时,无论置入1颗直径8mm钢珠,或1颗直径5mm钢珠,还是2-3颗直径4mm钢珠,均可将麦苗样品研磨成细泥状。 |
结论:
研磨管中样品的数量(重量)对研磨结果至关重要,而研磨珠的大小和数量对研磨结果不是最重要的因素,但大的研磨珠相比小研磨珠的研磨时间会缩短,越小的研磨珠研磨的细度越细。 样品体积不得大于试管的1/3。
附:0.1g小麦麦苗的实际称重, 可供参考
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本文关键词:植物粉碎机,小型植物粉碎机,实验室小型植物粉碎
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