资料摘要
资料下载(一)准备和安装 清洗好过滤器,干燥,放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜,用布包装好,15磅20 min进行高压灭菌处理。在超净台内打开过滤器架好,胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中,出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤,过滤后要检查滤膜是否完好无损。 (二)合成培养基的配制 1、根据细胞目录中的说明,按下表选择合适品牌及货号的培养基干粉,用适量超纯水充分溶解。 2、 按要求添加碳酸氢钠、谷氨酸钠、HEPES等,充分搅拌使之溶解。 3、 调 pH至7.2左右。 4、 加水至最终体积。 5、 在超净台中对溶液进行滤过除菌,分装入250 mL或500 mL玻璃瓶中,用翻帽塞塞紧瓶口。 6、 瓶口封好,4℃冰箱贮存。 (三)小牛血清的处理 市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理,但在使用前还应做热灭活处理,即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。胎牛血清不必灭活。 1、 将血清加热至56℃并保持30 min,其间要不时轻轻晃动,使受热均匀,防止沉淀析出。 2、 处理后的血清贮存于4℃。 3、 小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。 (四)生长培养基的配制 除无血清培养之外,各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。 1. 培养基分装成小瓶(100~200 mL)以便使用,翻帽塞塞紧瓶口。 2. 按如下比例配制: 基本培养基占80%~90%,小牛血清或胎牛血清占10%~20%。按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素),使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100μ/mL,。 (五)冻存细胞的复苏 1. 应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度,取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。 2. 在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内,约5ml左右,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养并内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养。 (六)传代: 1. 贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入完全培养基后继续培养或实验。 2. 悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。 (七)冻存 将贴壁细胞消化后离心收集,悬浮细胞直接离心收集,以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1~2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。 (八)注意事项 1. 玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上; 2. 无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上; 3. 培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天,肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存; 4. 消化液(pH7.8)或其它加入液,应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌,分装成支置-20度保存; 5. 培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上,如有高温灭菌的应按程序来菌)。至少每月一次。 6. 进入操作时应注意先清洗双手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往,如果数量较多,培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作,瓶与瓶之间应相隔一定的距离,开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧,打开后应用灯先烧口,然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。
选择PTFE镀膜真空泵的三大好处
简介:实验过程中常会遇到采用有机溶剂或酸碱性气体,不论是HPLC 移动相的溶剂纯化、消毒灭菌常用的漂白水、有机溶剂最常用的丙酮...等,如采用一般的真空帮浦来抽滤这类有机溶剂和具有腐蚀性的气体,很容易就会损坏真空帮浦。但耐腐蚀帮浦一台的要价都不便宜,因此在价格考虑下PTFE镀膜帮浦就是一个很好的选择。顾名思义,PTFE镀膜帮浦其与气体接触之隔膜及腔体皆镀膜 PTFE (如下图所示),气片也采用不锈钢#316制作,除可耐大部分溶剂,还能有效抵抗腐蚀性气体,让帮浦多了一层的保护。这样的设计大幅降低了材料成本,但又具有一定的抗有机和腐蚀气体的效果,是一种CP值非常高的优质帮浦设计。
实验室真空泵应该如何保养?
简介:1.包括数量多溶剂的事物请首先在烘箱或则干燥箱中去掉除掉大多的溶剂后,再运用真空泵抽真空。 2.水会腐蚀真空泵,所以含水的事物严禁运用真空泵抽真空。 3.扫除净尽调速器内腔、喷真空泵内腔的防锈油,参加规定牌号的润滑油油。 4.燃油管路里的防锈油也应在运用前扫除净尽,将燃油接入喷真空泵管路,不停地转动喷真空泵凸滑轮,直到出油阀紧座喷出干净的燃截止。 5.燃油选用合理。 6.务必运用标号合宜的燃油。 7..运用的燃油务必整洁,不能包括不论什么杂质和养分。 8.按准确的顺着次序运用抽气机,以避免倒吸现象发生。 9.运用完真空烘箱或者高温干燥箱后,必须做好保洁办公,擦整洁真空烘箱或者高温干燥箱的玻璃窗。 10.擦净外表防锈油。
无油真空泵的维修和保养
简介:实验室用的无油真空泵大致分为隔膜式真空泵和活塞式真空泵,隔膜式真空泵的工作原理是在密封腔体内电机带动轴承推杆拉动隔膜,通过隔膜的鼓动产生气流变换,密封腔体有两个开口,一个进气口一个出气口,如果真空泵的真空度不够,一般的情况就是气路出现了问题,气路的问题一般都集中在隔膜和腔体密封圈上面,如果密封圈没有损坏,那就是隔膜的问题,因为普通隔膜真空泵的隔膜都是橡胶材质的,抽气过程中容易接触到一些腐蚀性的气体,而且时间久了之后,橡胶隔膜本身也容易老化,换上新的隔膜之后,真空度都会恢复, 活塞式真空泵的工作原理和隔膜式真空泵的差不多,也是在密封腔体内电机轴承拉动活塞推杆(类是注射器)产生气流变换,如果真空度下降,一般情况是腔体密封圈不严密,活塞推杆有磨损等,以台湾洛科仪器的rocker系列活塞式真空泵为例,容易出现气路堵塞的地方是 1.rocker系列的真空泵都自带缓冲杯,缓冲杯的滤网时间长了之后容易堵塞,可以更换以解决堵塞。 2.rocker系列真空泵带有液体逆止阀,防止液体进入泵体,起到保护电机的作用,逆止阀是塑料材质,如果真空泵受到撞击,或是受有机溶剂腐蚀,逆止阀都有可能断裂,堵塞气路,更换逆止阀解决。 3.rocker系列真空泵安装有消音器,充分降低泵的噪音,因为有的用户抽滤的样品比较容易结晶,所以消音器有可能也会发生堵塞,这个时候消音器也需要更换,以恢复真空度。 rocker真空泵的设计精密,充分保护真空泵主体,出现真空度下降的情况,用户只需要更换耗材,就可以保证机器的使用寿命大大延长。 综上所述,实验室用的无油真空泵,不需要特别的保养,但使用过程有需要注意的事项: 1.不能让水进入真空泵内部,rocker系列真空泵有防护功能(专利设计)。 2.普通真空泵,不能抽滤有机溶剂和有腐蚀性的样品,必须要用带有防腐蚀字样的真空泵才能用。 台湾洛科仪器股份有限公司北京办事处愿和您一起学习和探讨真空泵的防护和维修。
实验室真空泵选型指导暨实验室真空泵简介
简介: 实验室使用的真空泵该如何选择是困扰很多使用人员的问题,很多使用人员再购买会真空泵之后,会遇到真空表观察真空度不够(吸力不够)、抽速太慢、在相对密闭的房间使用噪音过大、或者泵使用时有油雾没有办法正常使用等等各种问题。而这些问题往往都和选型有较大的关系。
台湾洛科Rocker选型目录册
简介:台湾洛科专业生产无油真空泵,真空过滤系统,防腐真空泵,多联过滤器,真空纯化系统,水质检测仪器,加热分解炉,COD检测仪器,欢迎来电
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