Biochrom分光光度计测定核酸的浓度
DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收,其吸收峰在260nm处。波长为260nm时,DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关,也随构型而有差异。
对标准样品来说,浓度为1μg/ml时,DNA钠盐的OD260=0.02。当OD260=1时,DNA浓度约为50μg/ml;RNA浓度约为40μg/ml;寡核苷酸浓度约为33μg/ml。
当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时,会影响DNA吸光度的准确测定。一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230,计算其比值来衡量样品的纯度。
核酸纯度判定(经验值):
纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白质、酚等污染)
纯RNA:1.7<OD260/OD280<2.0(<1.7时表明有蛋白质或酚污染;>2.0时表明可能有异硫氰酸残存)
计算待测样品的浓度: DNA样品的浓度(μg/μl):OD260×稀释倍数×50/1000
RNA样品的浓度(μg/μl):OD260×稀释倍数×40/1000
使用Biochrom分光光度计,设定参数后,可实现直接获取核酸的浓度、OD260/OD280等多个数值,从而对样品有一个全面的判定。
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