春天的脚步进了,又到了万物生长的季节。 G课堂带来全新专题,Biacore™!
众所周知,验证分子间相互作用是药物开发、质量控制的关键步骤,Biacore™利用表面等离子体共振(SPR)技术允许对生物分子的相互作用作实时,无标记检测,并通过响应值来描述相互作用状态的变化。
都说Biacore™的结合解离曲线是一条非常美丽的曲线,相信如果你在自己的Paper上附上一张优美无比且说服力100%的曲线,不仅能增加你整篇文章的颜值,跟能让读者和编辑对你的文章产生好感!那么这条曲线的意义以及所反映出的信心我们该如何解读呢?
如何显示表面等离子体共振数据?
Biacore™系统监测两个分子之间的相互作用,其中一个连接到传感器表面,另一个在溶液中是自由的。传感图是响应对时间的图,显示了相互作用的进展。该曲线在分析过程中直接显示在计算机屏幕上。
传感图中显示什么?
如下图所示吗,在样品注射期间(Sample段),可以在传感图中观察到阳性响应,因为分析物(在基于Biacore™的测定中溶液中的相互作用组分)与配体(在基于Biacore™的测定中连接到传感器表面的相互作用组分)结合。在解离期间(Running buffer重新充满通道)响应降低。分析周期完成后,再生溶液(Regeneration solution段)通过传感器芯片,去除结合的分析物,为下一个分析周期做准备。
典型的传感图,曲线下方的条表示通过传感器表面的溶液。
在相互作用的过程中我们可以获得哪些数据?
所有数据都会在传感图中呈现,可以提供一下几种数据:
l 结合力
分析物是否会和配体发生相互所用?
l 特异性
相互作用的配体在多大程度上可以和其他分子发生交叉反应?
l 浓度
有多少已知的分子是存在和有活性的?
l 动力学
结合和解离的速率是多少?
l 亲和力
分析物与配体的结合力到底有多强?
如何解释传感图?
传感图的形状给出了关于相互作用的信息。下面显示了如何解释传感图形状的几个示例。
1. 与目标分子结合/不结合
与目标分子结合 与目标分子不结合
2. 快速结合/解离与慢速结合/解离
快速结合解离 慢速结合解离
3. 强相互作用与弱相互作用
强相互作用 弱相互作用
4. 多步结合,响应值变化/多步结合响应值无变化
多步结合,相应值变化 多步结合,响应值无变化
OK,相信现在你已经明白如何来解读Biacore™的结合解离曲线了,因为Biacore是一种通用仪器,所以将Biacore应用于何种领域,您说了算!小G会在今后不断地与您分享更多的应用案例和实验技巧,请持续关注我们G课堂。
好了,我们下期再见!Bye Bye!
Biacore™ 品牌简介
BIA是英语"Biomolecular Interaction Analysis"的缩写,Biacore™提供了实时观察生物分子间相互作用的技术。通过它您能观察两种分子结合的特异性,能知道两种分子的结合有多强,还能了解生物分子的结合过程共有多少个协同者和参与者。Biacore™可以让您得到用其他技术方法难以得到的结果,因为它可以实时反映分子结合过程中每一秒变化的情况。无需借助标记物进行分析使Biacore™广泛应用于各类生物体系的测定,从各类小分子化合物、多肽、蛋白质、寡核苷酸和寡聚糖直至类脂、噬菌体、病毒和细胞。
Biacore™ 是一个通用的仪器,因为您可以任意偶连如上所述任一种生物分子到传感片表面。因此要将Biacore™应用在哪个领域,由您决定!
今天对生命科学奥秘的探索,已经不仅仅停留在是什么,而是要探询为什么。旨在揭示生命现象背后的机理研究,必然要理清生物分子间复杂的关系。只有Biacore™能实时反映生物分子相互作用的整个过程,而不同于其他只能提供生物分子作用后的结果的方法,为您开辟一个崭新的研究角度。
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