【CNS前沿文献追踪】 - 小胶质细胞帮助CART

肿瘤抗原的特异性及表达水平对于CART的疗效很关键，肿瘤特异性抗原往往存在异质性强的问题-同种肿瘤不同细胞间相同抗原表达水平不一，甚至随着治疗进行出现抗原表达丢失的现象，此次分享的是关于胶质瘤抗原CSPG4的内容，这个抗原很有意思，随着CART治疗其表达会出现上调。

胶质瘤患者肿瘤组织CSPG4免疫组化

肿瘤组织内CSPG4和平滑肌微丝蛋白α-SMA共定位

正常脑组织不会表达CSPG4

CSPG4表达水平和存活时间负相关

利用从病人身上取得的肿瘤构建了GBM-NS细胞系，这个细胞系在CSPG4表达水平上存在差异

GBM-NS细胞系上各种肿瘤抗原表达水平比较

制备了针对CSPG4抗原的带有4-1BB共刺激域的CART：CART细胞的CAR表达水平及亚型

CSPG4 CART体外能杀死肿瘤细胞

抗原刺激后，CSPG4 CART增殖

抗原刺激后，CSPG4 CART分泌细胞因子

体内对于高表达肿瘤抗原的肿瘤，CSPG4 CART能有效抑制肿瘤生长，延长小鼠存活时间

体内对于中等表达肿瘤抗原的肿瘤，CSPG4 CART能有效抑制肿瘤生长，延长小鼠存活时间

小动物活体成像及流式发现CSPG4 CART在体内存在时间长于对照组（看的是persistence）

CART干预后并未出现抗原丢失现象

上面用的是单一4-1BB共刺激域，测试CD28共刺激域及CD28/4-1BB双共刺激域：体外并未表现出优势（双刺激域并未表现出优势）

上面用的是单一4-1BB共刺激域，测试CD28共刺激域及CD28/4-1BB双共刺激域：体内也未表现出优势

上面用的是单一4-1BB共刺激域，测试CD28共刺激域及CD28/4-1BB双共刺激域：在persistence上未表现出优势

CSPG4 CART干预后，出现了一个很有趣的现象：CSPG4抗原（黑色峰为同型对照）表达出现上调（其他肿瘤抗原没有出现上调）

通过分选得到不同表达水平的细胞群体Black histograms indicate the expression of CSPG4 in CSPG4L and CSPG4H cells as compared to unselected BT168-NS

(white histograms)

体外培养分选得到的两种细胞，发现并未出现CSPG4抗原表达上调的现象

将分选得到的细胞分别移植到小鼠身上，体内培养一段时间后再分离检测发现：原来低表达组的抗原表达出现了上调，暗示体内的一些成分参与了抗原表达的调节

既然前面结果暗示是体内的成分参与了调控，所以检测了肿瘤微环境内的细胞，发现小胶质细胞浸润到了肿瘤部位

取得微环境组分进行分析发现相较正常脑组织，微环境内出现了两种细胞因子上调

发现了小胶质细胞浸润及细胞因子出现在肿瘤微环境，文献有报道称小胶质细胞能分泌TNF-α，所以做了肿瘤细胞GBM-NS分别与小胶质细胞和TNF-α共培养，发现两者均能引起肿瘤抗原CSPG4的表达上调（Light gray, gray, and dark gray histograms indicate CSPG4 expression after hTNF? stimulation, no stimulation, and isotype control）

分选出的、不同抗原表达水平的细胞经TNF-α刺激后均出现了CSPG4上调现象

上面结果从正面说明了TNF-α对于CSPG4上调的作用，开始反面验证-利用抗体阻断，发现阻断后诱导上调的作用消失，确证了TNF-α对CSPG4的上调作用

上面结果及文献均暗示了小胶质细胞和TNF-α存在关联，免疫荧光发现小胶质细胞（Iba1为小胶质细胞特异性marker）和TNF-α共定位-是小胶质细胞分泌的TNF-α进而引起CSPG4表达上调

CSPG4与小胶质细胞在组织层面空间上的相关性，结合前面的结果也说明是小胶质细胞分泌的TNF-α进而引起CSPG4表达上调

这篇文章设计的是针对肿瘤抗原CSPG4的CART，CART本身性质其实并不优异，最好的4-1BB CART的persistence在不足10天，文章作者在讨论部分讲这可能是因为血脑屏障的阻碍是的CART无法充分调动起免疫系统，这部分缺陷可通过多次“给药”来弥补！

笔者觉得这篇文章有提示意义的点在于：1、需要对共刺激域进行筛选，且多并不意味着好；2、CART和脑部小胶质细胞存在互动，小胶质细胞分泌TNF-α能促进CART识别的CSPG4上调-这个“巧合”很利于CART发挥作用，具有提示意义！之前的文章往往忽略了CART和自身免疫细胞的互动，新近的文章开始关注这点，下次分享的内容也涉及CART和自身免疫细胞的互动。

Pellegatta S, Savoldo B, Di Ianni N, Corbetta C, et al. Constitutive and TNFα-inducible expression of chondroitin sulfate proteoglycan 4 in glioblastoma and neurospheres: Implications for CAR-T cell therapy.[J]. Science translational medicine, 28 February 2018.

想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！