免疫系统分固有免疫和获得性免疫,此次分享关于调动固有免疫系统杀伤肿瘤的内容!肿瘤细胞会表达MICA/B蛋白,NK细胞通过NKG2D受体可识别MICA/B蛋白杀伤肿瘤细胞,但肿瘤细胞会进化出一种免疫逃避机制:通过酶水解掉表达于细胞表面的MICA/B躲避NK细胞的识别、杀伤!文章作者设计了一种单抗可结合到水解位点,阻断MICA/B的水解从而促进NK细胞对肿瘤细胞的识别、杀伤,具体内容如下:
设计:水解发生在α3结构域,用α3结构域(此结构域对于MICA/B是保守的)免疫小鼠筛以此位点为抗原表位的抗体,阻断水解抑制免疫逃逸的同时不干扰NK细胞NKG2D受体对于α1/2结构域的识别结合!此外单抗的Fc段还可以与Fc受体结合,诱导ADCC作用
筛得3个单抗,可以包含α3结构域的序列结合(6D4为阴性对照,可与MICA/B结合不与α3结构域结合)
筛得的单抗不影响NKG2D受体对MICA的结合
In vitro,筛得的单抗作用于A375细胞后能抑制MICA被水解进入培养上清,促进其在细胞表面的表达(阴性抗体6D4和同型对照无此作用)
以7C6为研究对象,7C6在体外能诱导NK细胞对肿瘤细胞的杀伤
单抗7C6能够抑制表达MICA的肿瘤细胞(B16F10和CT26)向肺部转移
7C6作用后小鼠血清中游离MICA浓度明显降低,说明单抗能够抑制MICA从肿瘤表面水解
7C6能够到达肿瘤部位
到达肿瘤部位后能够提供肿瘤细胞表面MICA的表达水平(与前面降低血清中MICA含量呼应)
In vivo实验用的小鼠并不是免疫缺陷小鼠,接种表达MICA的肿瘤之后会产生相应抗体,主要为IgG1亚型
既然所用小鼠产生了内源性抗体,需要看一下内源性抗体有无抑制肿瘤生长的作用,野生型小鼠和B细胞缺陷小鼠(无抗体产生)肿瘤生长曲线重合,暗示B细胞产生的内源性抗体并未对抑制肿瘤生长发生贡献
和在野生型小鼠上一样,7C6在B细胞缺陷小鼠上依然能够抑制肿瘤生长、抑制MICA水解进去血中,进一步确证抗肿瘤作用是单抗7C6直接引起的,并不依赖内源抗体
前面“正着”说明了单抗7C6的抗肿瘤作用,开始“反着”看:7C6只能抑制MICA/B表达于膜的肿瘤细胞生长,当不表达或表达分泌型MICA时无法发挥抗肿瘤作用
用抗体“敲掉”NK后7C6抗转移的作用消失,暗示7C6起效时NK细胞依赖的,效应分子层面则是穿孔素依赖的
基因水平的数据发现7C6作用后,NK细胞被激活
突变7C6的Fc段得到抗体7C6-DANA(无法与Fc受体结合,但依然能够抑制MICA的水解-支撑文档里有相应数据,略):失去Fc结合能力后杀伤肿瘤细胞能力降低,阻断NKG2D受体后单抗杀伤能力亦降低,暗示单抗杀伤肿瘤作用是Fc受体、NKG2D受体依赖的 – In vitro
In vivo再次验证7C6起效是NK细胞、Fc受体、NKG2D受体依赖的(Fcgr3a对应Fc受体,Klrk1对应NKG2D受体)
在NSG小鼠上用人的NK和肿瘤验证单抗功能
7C6能够抑制肿瘤细胞肺转移、延长存活时间
7C6还能抑制肝转移,且不依赖NK!肝脏驻扎着巨噬细胞,“敲掉”巨噬细胞抑制肝转移的作用消失,暗示7C6还调动起了肝脏巨噬细胞 – 通过Fc段
对肝脏巨噬细胞进行分析发现7C6促进了巨噬细胞的激活
不同于CART对T细胞“大刀阔斧”的改造,这篇文章的思路更像是“投石击水”,不做很大改变,用一个单抗保护住MICA/B后通过本来存在的NKG2D、Fc受体调动NK细胞 - 用更“本来”的东西实现目的!重头戏是拿到单抗 – 这其实是结构生物学家的工作,细胞生物、分子生物学、免疫学家熟悉“过程”,“过程”以结构为基础发生,这篇文章是“大家”合作完成的!
Ferrari L D A, Tay R E, Pan D, et al. Antibody-mediated inhibition of MICA and MICB shedding promotes NK cell-driven tumor immunity.[J]. Science, 2018, 359(6383):1537-1542.
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