重要通知:电转染小课堂开课啦
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重要的事情说三遍
大家快赶紧关注
从本期开始将分享电转染方面的知识以及如何优化电转参数
Part 1 什么是电转?
电转即电穿孔,是一种有效的非病毒介导方法,可以将基因或其他分子高效地导入原核生物或哺乳动物细胞中。通过这种方法导入目的基因可以建立一个瞬时转染,以此来研究蛋白质表达,或可以导入siRNA来敲除或“沉默”基因,同时也可以通过电转方法来进行基因靶向和功能研究。
Part 2 电穿孔技术是如何将外源物质导入细胞中的?
电穿孔仪利用直流电脉冲瞬时电击细胞,增大细胞膜通透性或使细胞膜形成小孔,从而使小分子物质,如染料、寡核苷酸、肽等物质进入细胞。当直流电场去除掉,细胞膜可恢复原来的状态。
电转染的方法较化学法、脂质体法、和病毒法具有效率高、费时少、成本低、无细胞毒性等特点,因而被广泛采用。但是电击过大会造成细胞死亡,而电击不足会造成转染效率低,所以我们在进行电转染实验之前,需要对转染相关参数进行优化,以使转染效率增加。
Part 3 如何评估转染效果?
我们一般用转染效率和存活率评估转染实验的效果。转染效率可以用β-半乳糖苷酶测定法/氯霉素乙酰转移酶测定法/绿色荧光蛋白法/流式细胞仪筛选法测定。细胞存活率可以用流式细胞仪筛选法/台酚蓝染色法测定。
转染效率=转染的细胞数/活的细胞数
细胞存活率=活的细胞数/总的细胞数
进行电转染实验时,增加场强,转染效率会增加,但是细胞存活率会降低,因此必须优化电参数,以寻求转染效率和存活率之间的平衡点。
下期预告:电转染小课堂之如何选择波形?
自从1938年BTX推出商用电穿孔仪以来,BTX一直处于电穿孔技术的最前沿,一直致力于为各种细胞和组织类型提供完整的转染解决方案,包括真核生物,原核生物,体内组织,卵内,子宫内,贴壁和悬浮培养,植物细胞,皮肤和肌肉免疫。除电穿孔仪外,BTX还为各种应用提供和研发专业的电极。北京德泉兴业商贸有限公司为BTX在北京和东三省地区的一级代理。欢迎致电联系我们。
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