主讲人:邓玮博士
国家蛋白质科学中心·上海 规模化蛋白质制备系统运维主任
1999-2003年 武汉大学化学与分子科学学院 本科
2003-2008年 中科院上海有机化学研究所 生命有机化学博士,从事天然产物生物合成研究
2008-2012年 美国密西根大学生化系雷鸣教授课题组从事dna损伤修复途径中重要复合物soss的功能及结构研究,成功解析了多个重要复合物结构并进行相关功能研究获得重要发现。
2012年-至今 国家蛋白质科学中心,担任规模化蛋白质制备系统主任,从事自动化高通量生物科学实验研究工作,参与设计了多套自动化生物科研系统,并进行相关科研应用开发。
在酶的定向进化 、组合合成生物学、微生物表面展示技术及高通量克隆构建等技术领域中,如何能做到高通量快速挑选克隆以提高工作效率?qpix微生物自动化高通量筛选平台可帮助实现省时省力。
本讲座将介绍其在蛋白质科学方面一种新的应用----高通量快速筛选蛋白质的可溶性表达条件,为进一步的生物化学、结构学研究打下基础。
工作流程:
1、运用c端融合表达二氢叶酸还原酶(dhfr)的载体系统高通量的筛选具有正确读码框的随机pcr克隆质粒
2、运用分段式的gfp荧光活性筛选系统快速分选出细胞内有目标蛋白可溶性表达的克隆
3、运用体外荧光筛选技术区分出可溶性蛋白表达量的高低。
图1 运用qpix进行高通量蛋白可溶性筛选整体流程示意图
图2 结合cloneselect imager观察荧光强弱
运用这种方法可以快速高通量判断蛋白可溶性的强弱
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