砥志研思丨Adamas-life® 酶联免疫吸附测定试剂盒

上海泰坦科技股份有限公司

酶联免疫吸附测定（ELISA），是实验室里较常使用的利用抗原抗体特异性结合发生免疫反应，对靶蛋白进行定性和定量检测的方法。ELISA虽然原理和操作不复杂，但涉及的环节和试剂较多，稍有不慎就会影响实验结果。

优质的实验仪器和试剂加上正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。Adamas-life^® ELISA试剂盒品种齐全，品质可靠，是用于酶联免疫吸附测定的优质选择。

双抗体夹心法ELISA通用原理图

Adamas-life^® ELISA试剂盒的优点

品种齐全：能检测人、大鼠和小鼠等种属的血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液、尿液、羊水、腹水、脑脊液、胸腔积液、组织匀浆液等多种类型样本。

灵敏度高：检出量达1.56pg/mL。

重复性好：板内、板间变异系数均小于10%。

特异性强：与非目标蛋白无明显交叉反应。

品质可靠：生产原料均来自国外著名厂家。

ELISA的操作技术要点

下文主要从样品的制备和保存、标准曲线绘制、加样、洗板和显色与终止五个方面来介绍双抗体夹心法ELISA操作技术要点。

样品的制备和保存

ELISA的检测样品类型很多，以常用的血清和血浆为例。

血清：将全血在室温下放置30分钟至1小时，不要剧烈摇晃以免溶血，待全血自然凝固，析出的淡黄色液体就是血清。制备时不能添加任何防腐剂或抗凝剂。可在全血凝固后低温低速离心10分钟来获取较多的血清。

血浆：在收集试管内先加入一定比例的抗凝剂（推荐EDTA），将血液加到一定量后轻轻颠倒摇动收集管以混匀血液。低温低速离心10分钟后得到的上清即为血浆。

吸取血清或血浆时要用毛细吸管贴着液面逐渐往下吸，切记不要吸取细胞成分。若待测样品不能及时检测，样品制备后请分装，冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

标准曲线绘制

ELISA的标准曲线是标准品的浓度和OD值之间的函数关系。标准品曲线制作的准确操作和拟合回归方程的选择对样品中目标蛋白浓度推算十分重要。

标准曲线常用的拟合回归方程主要为直线拟合回归方程、二次多项式拟合回归方程、三次多项式拟合回归方程、四参数拟合回归方程、半对数拟合回归方程、Log-Log 拟合回归方程和Logit-Log 拟合回归方程等。

双抗夹心法ELISA试剂盒常选择直线、二次多项式、四参数三种，除了试剂盒推荐的拟合方式，其他的拟合方式也可以尝试。方程拟合的好坏主要看R²的值，越接近1，拟合效果越好。

小鼠IL-6标准曲线

加样

在双夹心ELISA检测中有3次加样步骤：加样、加标准品、加酶标抗体和底物。如果是生物素化抗体和辣根过氧化物酶标记的链霉素系统，则还需增加一次加样。

加样操作示意图

加样：应将所加物质加在微孔板底部，避免加在孔壁上部，并且不可溅出和产生气泡。小心操作，避免触碰微孔板底部，以免微孔包被面被吸头划破。每次加样都要更换吸头，以免交叉污染。每次加完样都要确保试剂充分混匀。

加标准品：需要遵循浓度由低到高依次加入，同一浓度平行加入的原则。

加酶标抗体和底物溶液：可使用多道移液器，提高加液效率，减少因加液时间过长而引起的实验误差。

洗板

洗板过程非常重要，洗涤不充分会使背景值或阴性对照值偏高，洗涤步骤过于剧烈会使阳性对照值或吸光度偏低。洗板可以使用手动洗板或洗板机洗板。

手动洗板：要快速垂直甩尽酶标板中的液体，避免液体进入其他孔造成交叉污染，再在洁净的吸水纸上拍干。

洗板机洗板：需注意调节机器洗涤系统的压力，按说明书要求设置洗涤液加液体积和注入与吸出间隔时间。

显色与终止

显色底物在添加之前应是无色的，且始终处于避光状态。显色反应要避光进行，按说明书要求控制反应温度和反应时间。

终止液的添加顺序应与显色底物的添加顺序相同。添加终止液之后，底物的颜色应由蓝色转变为黄色。如果底物呈现绿色，说明终止液与显色底物没有充分混匀。加终止液后3分钟内读数，停留时间过长会造成背景值或阴性对照值偏高。

显色反应示意图

ELISA操作有许多细节需要注意，本文如有未尽之处，欢迎大家在公众号回复补充。可以来【探索平台】订购优质高效的Adamas-life® ELISA试剂盒，祝大家每次实验都能取得满意的结果。

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