猪伪狂犬病毒抗原双抗夹心法实验检测说明

2016-08-16 09:23 下载量：1

资料摘要

资料下载

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被猪伪狂犬病毒抗原（PRV-Ag）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、阴性和阳性对照、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪伪狂犬病毒抗原（PRV-Ag）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），判定阴阳性。样本处理及要求 1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过ye后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃ 或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤 1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。 2. 设置阴性对照孔、阳性对照孔和样本孔，阴性、阳新对照孔各加 50μL 对照品； 3. 样本孔中加入待测样本 50μL；空白孔不加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。实验结果计算 1. 阴性对照OD值：小于0.2。 2. 阳性对照OD值：大于0.8。 3、阳性判断（Cut-Off值）：阴性对照OD值+0.15，样本OD值大于阈值，判定为阳性，反之，为阴性。

资料下载

文献贡献者

上海酶联实业有限公司

银牌会员 | 第5年

查看全部资料