色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负着分离工作的色谱柱是色谱系统的心脏。目前市场上色谱柱种类和规格繁多,在制药、食品、环保、石化、农林、医疗卫生等领域有应用广泛,相关从业人数不断增长。
以往大家比较关注色谱柱的应用情况,为使大家更全面的了解色谱柱类别、相关技术及最新应用进展等内容,仪器信息网特别策划了“走近色谱的‘心脏’——色谱柱新技术新应用”专题,并邀请色谱柱主流厂商来分享对色谱柱类别、技术发展及最新应用进展的看法。此次,我们特别邀请Kromasil公司谈一谈色谱柱发展历程、市场情况及常用色谱柱类别。
仪器信息网:请介绍下贵公司色谱柱发展历程
Kromasil:Kromasil是Nouryon旗下高效化学品著名品牌,自1988年研发出用于胰岛素高压制备纯化的C8填料以来,至今已有30余年的色谱填料和色谱柱研发生产历史。Kromasil作为全球领先的高性能硅胶填料生产商,其多孔球形硅胶基质填料可广泛应用于胰岛素及其类似物、比伐卢定、利拉鲁肽、胸腺法新、达托霉素、EPO等蛋白、多肽及小分子药物等的分离纯化,并作为色谱柱的基体填料被广泛应用,Kromasil色谱柱也已广泛应用于中药,化药,多肽类药物,高校科研,以及食品检测中。Kromasil的宗旨是“为制药行业提供性价比最高的、以多孔球形硅胶为基体的用于分离纯化的色谱填料和用于分析的色谱柱”。
Kromasil的液相色谱柱产品
仪器信息网:请介绍下液相色谱柱的发展历程及市场规模
Kromasil:自1906年俄罗斯植物学家茨维特首次提出色谱的概念,时隔50余年,于1960年代末科克兰(Kirkland)等学者开发了世界上第一台高效液相色谱仪,1970年代初市场上首次出现了商品化的C18液相色谱柱,经过近半个世纪的发展,色谱柱填料基体发生了急剧的变化,由开始的无定型填料发展到球形填料,由薄壳型填料到全多孔填料,由全多孔填料发展到核壳粒子,由大颗粒到亚3μm,亚2μm颗粒,现在商品化色谱柱的柱效已经高达10万-50万/m。与此同时,色谱柱的键合相种类也不断增多,据统计现在市场上已有多达1000多种色谱柱键合相可供选择。
正是基于色谱技术的不断发展,其应用领域得以极大扩展,同时市场需求量也在不断攀升。根据行业调研报告显示,2018年全球色谱柱年消费量已达378万支,产值超百亿,其中中国市场年色谱柱消费量约32万支,对应约10亿市场规模,约为美国市场的20%,欧洲市场的28%。对比欧美市场,中国市场色谱柱未来仍有较大增长空间,我们也一直非常看重中国市场。
仪器信息网:请介绍下常用的液相色谱柱固定相有哪些?
Kromasil:虽然目前市场上液相色谱柱的基体和键合相多种多样,但是目前对于大多数小分子化合物和多肽类药物分析,常用的液相色谱柱固定相主要有三大类:全多孔高纯硅胶固定相、聚合物修饰固定相和实心核固定相。
全多孔高纯硅胶固定相
全多孔高纯硅胶基体色谱柱具有柱效高,耐压强度高,易键合,种类丰富等特点,目前应用非常广泛。常见的键合相有C18,C8,NH2,CN, Diol,HILIC,手性柱等多种可选。市场上多家均有此类色谱柱,如Kromasil Classic系列,沃特世 Sunfire/Symmetry系列,安捷伦Zorbax XDB系列, SGLC Inertsil系列,Phenomenex Luna系列等。不过由于各家色谱柱硅胶来源不同,键合技术和参数也有较大区别,所以不同品牌的色谱柱往往具有互补的选择性。其中Kromasil Classic C18由于碳含量较高(20%含碳量),pH耐受范围较宽(pH范围1.5-9.5),端基峰尾充分,金属离子残留量极低,且从硅胶大批量生产到键合,装填,出厂检验等均在瑞典哥德堡工厂完成,以确保稳定的批次重现性,本系列色谱柱非常适合于中低pH条件下复杂组分的分析,多年来已大量应用于中药,化药,多肽类药物以及食品检测中。2015版药典中共有27个品种推荐Kromasil此系列色谱柱。
Kromasil球形高性能硅胶
虽然全多孔高纯硅胶基体色谱柱可以应对多数中性和酸性化合物的分析,但其仍有壁垒。该类色谱柱pH耐受范围有限,当流动相pH>8时硅胶容易水解。所以当我们做碱性化合物分析,需要较高的pH条件时,选择宽pH耐受范围的色谱柱就显得很有必要。
聚合物修饰固定相
聚合物基体色谱柱、杂化颗粒色谱柱以及聚合物修饰固定相均可用于高pH值条件下的分析,但是聚合物基体色谱柱由于其耐压强度差(一般耐压低于10Mpa),柱效低,键合相种类少,价格昂贵等,在小分子化合物分析中应用较少。而聚合物修饰固定相的色谱柱既具有硅胶基体的高柱效,高耐压性能,又具有很强的耐受性,所以被广泛应用于小分子化合物尤其是碱性化合物的分析中。
Kromasil在2009年就推出了第一代宽pH耐受范围色谱柱Eternity系列,pH耐受范围达到1.0-12.0,其中Eternity C18曾作为为数不多的可用于阿奇霉素分析的色谱柱品牌,被药企和药检所客户所使用。2012年Kromasil又推出第二代EternityXT系列色谱柱,相比第一代Eternity系列,EternityXT系列含碳量更高,耐受性更强,为苛刻条件下的分析提供更多选择。
Kromasil EternityXT色谱柱. 聚合物修饰固定相
实心核固定相
二十世纪60年代,Horvath提出薄壳粒子的概念,后在2007年出现商品化的产品。现在的实心核固定相与之前的薄壳粒子相比,其比表面积剧增,克服了早期薄壳粒子填充柱样品负载量低的问题。它结合了全多孔粒子和非多孔粒子的优点,并且这种粒子体积的75%是多孔的,可以保持较高的负载量。实心核色谱柱具有分析速度快,扩散小,峰型尖锐等特点,非常适合于高通量快速分析。随着实心核色谱柱键合相的增多,其正被越来越多地应用于药物溶出分析、临床检测、食品检测等领域。
2020版药典第一次征求意见稿—通则2341农药残留量测定法中,已明确规定将核壳柱用于农药残留量的测定。目前Kromasil拥有ClassicShell和EternityShell 两大系列核壳柱,这两个系列色谱柱具有比肩UHPLC的柱效和分离度,2.5μm填料色谱柱的反压仅为UHPLC的50%,而EternityShell系列可提供在极限条件下(pH耐受范围1-12)的超快分析能力,可用于实验室大批量样品的快速分析。
Kromasil EternityShell系列核壳柱
实心核固定相
除了以上常用的色谱柱固定相,近年来随着生物医药大分子的发展,对色谱柱技术提出了新的要求,Kromasil作为全球为数不多的硅胶填料生产商,也将不断研发新的技术和色谱填料,满足行业日益发展的需求。
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