白细胞介素-2（interleukin-2;IL-2 ）

2015-07-27 09:47 下载量：1

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其他名称：T细胞生长因子(T cell growth factor,TCRF) 定义：主要由活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子。是所有T细胞亚群的生长因子，并可促进活化B细胞增殖，故为调控免疫应答的重要因子，也参与抗体反应、造血和肿瘤监视。【中文名称】：白细胞介素-2 【简写拼音】： BXBJS-2 【英文名称】： Interleukin-2 【所属类别】：免疫增强剂||其他抗肿瘤药及辅助治疗药【别名】白间素, 欣吉尔, T细胞生长因子 ,白细胞介素-2 【外文名】Interleukin-2 ,IL-2 【适应症】白介素－2是一个分子量为14500的糖蛋白，它刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的T细胞增殖。重组白介素－2可用于临床研究。主要用于肾癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效（Rossenberg）。LAK细胞代表1个有单核巨噬细胞，B和T淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些LAK细胞似乎对癌细胞有特异作用。此外，LAK细胞（不象T细胞）介导杀伤不受MHC的约束。[1] 1 材料和方法：　　1.1 制备粗制IL-2无菌采血，肝素抗凝，用RPMI1640按1∶1将血液稀释，然后重层于菲可液面上，以1 500r/min离心30min，取白细胞层，用RPMI1640洗2次，按1～3×10细胞/ml浓度加入10%胎牛血清RPMI1640，注入一装有磁棒的大瓶中，置37℃搅拌培养4天，取出，分装于50ml离心管中，1 500r/min离心20min，弃上清液，将细胞悬浮于1%胎牛血清RPMI1640培养液中，使细胞浓度为106细胞/ml。同时加入纯质PHA1～2μg/ml以及多种B淋巴母细胞株，使其浓度为106细胞/ml，37℃搅拌培养18～24h后，取出以1500r/min离心30min，取上清，用045μg滤膜过滤除菌，滤液即为粗制IL-2。　2 制备精品IL2 　　2.1 硫酸铵沉淀与真空浓缩透析：在4℃下将硫酸铵粉末按50%饱和量加入上述粗制IL-2中，搅拌2h，12000g离心30min，取上清液，再加入80%饱和硫酸铵，4℃过夜，次日以12000g离心30min，弃上清液，将沉淀溶于1% PEG 6 000的1∶2 PBS溶液(pH值73)中，置真空负压浓缩透析器中透析浓缩至所需容量。　　2.2 Sephadex G100凝胶过滤：用2×180cm的过滤柱及PBS(同上)，以80ml/h流速过滤。将各管洗脱液用紫外分光光度计280nm检测其OD值。同时将几种不同分子量的标准蛋白也用相同条件过滤及检测其OD值，绘出IL-2及标准蛋白OD值的曲线。将各管洗脱液过滤除菌后，作白细胞生物活性试验，按试验结果绘出曲线，找出具有最高IL2活性的几管洗脱液，混合后，作下一步精制。　　2.3 BlueSepharose层析：将上述混合后的洗脱液加入BlueSepharose柱中，流速约15ml/h，按每管10ml收集流出液，当样品全部流出柱中以后，用上述PBS洗涤样品柱，再用梯度NaCl溶液(从0075mol/L至06mol/L NaCl的PBS溶液)洗脱，按2ml/管收集洗脱液。NaCl 溶液梯度及流速均由梯度混合器调节控制。洗脱完毕后，作各管OD值及NaCl浓度的测定。各管洗脱液过滤除菌后，作出生物活性测定。将峰值前后的数管洗脱液混合，即为精制的IL2。置－20℃冰箱保存。　　3 检定　　3.1 活性测定用10%胎牛血清RPMI1640将上述IL2稀释为50%、25%、125%、625%，而后再将每个百分浓度以及100%浓度的IL2倍比稀释，自1∶2至1∶128，将每个稀释度分别加入多孔板的孔中，每孔01ml。然后取CT6细胞株(小鼠的IL2依赖性T细胞株)，调整浓度为106细胞/ml，每孔加入01ml，同时用培养基代替IL2作对照。将多孔板培养24h后，取出按每孔1μci的浓度加H3标记胸腺嘧啶核苷继续培养4h。取出后用MESHⅡ细胞收集器过滤洗涤细胞，用β计数器测定各孔细胞的cpm。必要时按此结果绘出曲线，确定活性单位。

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文献贡献者

江莱-试剂,Elisa试剂盒供应商

银牌会员 | 第5年

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