方案摘要
方案下载应用领域 | 制药 |
检测样本 | 生物药品 |
检测项目 | 其他 |
参考标准 |
在现代医学中,输血是出血性休克、贫血等病症重要的治疗方法,也是常规手术的重要组成部分,但是肝炎及AIDS等小概率传播风险,总是干扰着输血的安全进行。此外,输血前,还需对供体血液进行分型,并与受体血型交叉匹配,以避免出现排异现象。对此,一种相对简便的替代方法是,使用血红蛋白(Hb)类氧载体(HBOCs)取代供体红细胞(RBCs),其具有以下优点:首先,由于HBOCs表面没有血型抗原,一般不会引起排异现象;其次,在Hb纯化过程中灭活并清除了病毒,所以大大降低了血源性疾病传播的可能性。 Hb通常从人或牛RBCs(hRBCs或bRBCs)中提取。对纯化的Hb进行化学修饰是HBOCs合成的一种主要途径,化学修饰型HBOCs可以通过分子内交联Hb、聚合Hb或将聚合物结合到Hb表面的方法来完成。Hb也可以包埋到固体或中空颗粒内部,以形成非化学修饰型HBOCs。 从裂解的RBCs中提取并纯化Hb前,需先去除血液中的白细胞、血小板及血浆成分,可先离心并漂洗血液,以分离血浆和白细胞层。所得的RBCs再用低渗溶液孵育裂解。 从RBC裂解液中纯化Hb的方法有很多种,包括有机溶液萃取以及离子交换色谱分离。色谱方法又可以大体归类为吸附方法(Hb被截留在固相介质内,然后溶剂洗脱)或直流方法(杂质被截留,而Hb被洗脱)。直流方法消除了吸附和洗脱过程,但与吸附方法相比,所得的Hb纯度较低。但两者都受到血细胞裂解方法及裂解状态的影响。 在还原剂存在的绝氧条件下进行加热,也可以进行Hb的纯化。在该过程中热敏感性蛋白选择性沉淀,而病毒被灭活,但Hb也有可能因为高温而失活,所以需要添加稳定剂,以防止Hb变性。 微滤和超滤也是Hb纯化的常用技术,可有效降低Hb溶液中的病毒载量。但是常规的过滤技术通常需要配合化学修饰和分馏操作,以从未修饰型Hb和其它杂质中分离修饰型Hb,且由于细胞碎片堵塞膜孔,造成流速降低。针对这些问题,本文将介绍一种多阶段式过滤方法。在该方法中,大多数细胞碎片在第一阶段(膜MWCO 50nm)被清除,然后连续过滤,逐步清除较大的细胞碎片和分子。该技术相对简单,且可同时进行Hb的纯化和浓缩。
中空纤维切向流过滤结合膜层析制备高纯度HSV-2候选疫苗ACAM529
使用串联切向流过滤高效浓缩慢病毒载体
切向流微滤:水体细菌快速富集
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