细菌的冷冻干燥流程
1.冻干管的准备 选用中性硬质玻璃，95*材料为宜，内径约50mm，长约15cm，冻干管的洗涤按新购玻璃品洗净，烘干后塞上棉花，可将保藏编号，日期等打印到纸上，剪成小条，装入冻干管。121°C灭菌30min。
2.菌种培养 将要保藏的菌种接入斜面培养，产芽孢的细菌培养至芽孢从菌体脱落或产孢子的放线菌、酶菌至孢子丰满。
3.保护剂的配制 选用适宜的保护剂按使用浓度配制后灭菌，随机抽样培养后进行无菌检查，确认无菌后才能使用。（糖类物质需要用过滤器除菌，脱脂牛奶112°C，灭菌25min。）
4.悬菌液的制备 吸2～3ml保护剂加入新鲜斜面菌种试管，用接种环将菌苔或孢子洗下振荡，制成菌悬液，真菌菌悬液则需置4°C平衡20～30min。
5.分装样品 用无菌毛细管吸取菌悬液加入冻干管，每管装约0.2ml。最后在几只冻干管中分别装入0.2ml、0.4ml蒸馏水作对照。
6.预冻 用程序控制温度仪进行分级降温。不同的微生物其最佳降温度率有所差异，一般由室温快速降温至4°C，4°C至-40°C每分钟降低1°C，-40°C到-60°C每分钟降低5°C。要是条件不具备，可以使用冰箱逐步降温，从室温至4°C再到-12°C（三星级冰箱为-18°C）→-30°C→-70°C，也可用盐水、干冰代替。
7.冷冻真空干燥 启动冷冻干燥机制冷系统。当温度下降到-50°C一下时，将冻结好的样品迅速放入冻干机钟罩内，启动真空泵抽气直到样品干燥。样品干燥的程度对菌种保藏的时间影响很大。一般要求样品的含水量为1％～3％，判断方法：a.外观 样品表面出现裂痕，与冻干管内壁有脱落现象，对照管完全干燥；b.指示剂 用3％的氯化钴溶液分装冻干管，当溶液的颜色由红变浅蓝后，再抽同样长的时间便可。
8.取出样品 先关真空泵、再关制冷机，打开进气阀使钟罩内真空度逐渐下降，直至与室内气压相等后打开钟罩，取出样品。先取几只冻干管在桌面上轻敲几下，样品很快疏散，说明干燥程度达到要求。若用力敲，样品不与内壁脱开，也不疏松，则需急需冷冻真空干燥，此时样品不需事先预冷。
9.第二次干燥 将已干燥的 样品管分别安在歧形管上，启动真空泵，进行第二次干燥。
10.熔封 用高频电火花真空检测仪检测冻干管内的真空程度。当检测仪将要触及冻干管时，发出蓝色电光说明管内的真空度很好，便在火焰下熔封冻干管。
11.存活性检测 每个菌株取1只冻干管极是进行存货检测。打开冻干管加入0.2ml无菌水，用毛细滴管吹打几滴，沉淀物溶解后（丝状真菌、酵母则需要置室温平衡30～60min），转入适宜的培养基培养，根据生长状况确定其存活性，或用平板计数法或死活染色方法确定存活率。如需要可测定其特性。
12.保存 置4°C或室温保藏（前者为宜）。隔时进行检测。
该方法是菌种保藏的主要方法，对大多数微生较为合适、效果较好，保藏时间依不同的菌种而定，有的为几年，甚至为30年。取用冻干管时，先用75％乙醇将冻干管外壁擦干净，再用砂轮或锉刀在冻干管上端划一小痕迹，然后将所划处向外，两手握住冻干管的上下两端向外用力便可打开冻干管，或将冻干管近口烧热，在热处滴几滴水，使之破裂，再用镊子敲开。
真空冷冻干燥技术在生物工程、医药工业、食品工业、材料科学和农副产品深加工等领域有着广泛的应用。药品冷冻干燥包括西药和中药两部分。西药冷冻干燥在国内已经得到了一定的发展，很多较大型的制药厂都有冷冻干燥设备。在中药方面，目前还只局限在人参、鹿茸、山药、冬虫夏草等少量中药材的冻干，大量的中成药还没有采用冻干工艺，与国外差距较大。 在生物技术产品领域，冻干技术主要用于血清、血浆、疫苗、酶、抗生素、激素等药品的生产；生物化学的检查药品、免疫学及细菌学的检查药品；血液、细菌、动脉、骨骼、皮肤、角膜、神经组织及各种器官长期保存等。
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