如何使用氯化钙制备大肠杆菌感受态细胞

2013-10-11 08:01  下载量:1

资料摘要

资料下载

1)从于37℃培养16-20小时的新鲜平板中挑取一个单菌落(直径2-3mm),转到一个含有100ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养约3小时(旋转摇床,300转/分)。为得到有效转化,活细胞数不应超过108细胞ml,可每隔20-30分种测量OD600值来监测培养物的生长情况。在菌株与菌株之间,OD600值和每毫升中活细胞数间的关系变化很大,因此有必要通过测量特定大肠杆菌菌株的生长增减物在生长周期的不同时相的OD600值,并将各黧度的增减物铺于无抗生素的LB琼脂平皿以计算每一时相的活细胞数,从而使分光光度读数得到标化。 2)在无菌条件下将细菌转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的50ml聚丙烯管(Falcon 2070)中,在冰上放置10分钟,使培养物冷却至0℃。切记:下述所有步骤均需无菌操作。 3)于4℃用Sorvall GS3转头(或与其相当的转头)以4000转/分离心10分钟,以回收细胞。 4)倒出培养液,将管倒置1分钏以使最后残留的痕量培养液流尽。

资料下载

文献贡献者

相关资料 更多

相关产品

当前位置: 上海士锋生物 资料 如何使用氯化钙制备大肠杆菌感受态细胞

关注

拨打电话

留言咨询