基因芯片实验中的细胞和组织制备规程

2014-07-17 07:06 下载量：1

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一个完整的基因芯片实验包括以下几个步骤：研究课题的提出、芯片设计、样品制备、杂交反应、数据分析和处理。本文主要介绍其中的样品制备(细胞标本采集和组织标本采集)的建议做法。细胞标本采集操作建议规程 1. 所有样品均应有样品标签(注明样品编号)，同时有一张样品登记表，写明样品名称、种类、编号、取样日期、样品处理情况等。 2. 一张芯片实验一般要求细胞数在1E+08，建议设计实验和收获细胞时可考虑多收集一些。 3. 贴壁与悬浮细胞培养诱导结束后，去除培养液，保留的细胞用PBS缓冲液洗一下，除去缓冲液，加溶液D*充分溶解细胞，放入液氮运输。样品量以实际得到的total RNA为准。 4. 血液：将白细胞分离出来，加溶液D充分溶解细胞，放入液氮运输。样品量以实际得到的total RNA为准。 5. 如果是细胞未经溶液D处理，直接冻入液氮罐(不推荐)。工作人员会对细胞作相关处理，以便为细胞记数。 6. 以上提到的均是新鲜细胞，对一些已老化或质量不明的细胞，工作人员有权提出疑义，并要求退回或重新取样。不同组织抽提3-10μg mRNA所需组织量器官/组织* 提取3μgmRNA所需组织量(克) 提取10μgmRNA所需织量(克) 总RNA得率[单位:毫克RNA/克组织] mRNA所占百分比[%] 成人正常组织肝 0.2083 0.6944 1.80 - 1.80 mg/g 0.80 成人正常组织脑缺数据缺数据 1.30 - 1.30 mg/g 缺数据成人正常组织肺 0.3000 1.0000 1.00 - 1.00 mg/g 1.00 成人正常组织心 0.5000 1.6667 0.60 - 0.60 mg/g 1.00 成人正常组织胃 0.1852 0.6173 2.70 - 2.70 mg/g 0.60 成人正常组织喉 0.3125 1.0417 1.20 - 1.20 mg/g 0.80 病理组织结肠癌 0.2521 0.8403 1.70 - 1.70 mg/g 0.70 病理组织胃癌 0.4317 1.4388 0.50 - 0.50 mg/g 1.39 病理组织空肠腺癌 0.3571 1.1905 1.40 - 1.40 mg/g 0.60 病理组织直肠癌 0.1604 0.5348 1.70 - 1.70 mg/g 1.10 病理组织肝癌 0.1116 0.3720 3.84 - 3.84 mg/g 0.70 病理组织肺癌 0.1282 0.4274 2.00 - 2.00 mg/g 1.17 考虑到个体差异以及样品在研磨、匀浆等过程中的损失，客户提供的样品量应在上述基础上增加1-2倍。组织标本采集操作建议规程铝箔经DEPC水浸泡过夜，78°C烘干，高压灭菌后烘干 1.5 ml 微离心管 15 ml 聚丙烯离心管市场有售RNAase-Free的相应规格离心管标签纸记号笔样

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文献贡献者

广州谱恩科学仪器有限公司

银牌会员 | 第10年

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