Bcl-2原癌基因的检测

2015-06-23 08:15  下载量:1

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Bcl-2原癌基因被认为是哺乳动物细胞凋亡过程中的负调控剂。本法采用鼠抗Bcl-2单克隆抗体,可通过免疫组化或免疫细胞化学的方法用于检测组织或细胞中的Bcl-2,或者通过Western blots检测细胞粗提物。 样本来源 1. 离心细胞; 2. 细胞涂片、冰冻或石蜡包埋组织切片; 3. 细胞粗提物。 材料与试剂 1. 鼠抗Bcl-2单克隆抗体; 2. 碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP); 3. PBS缓冲液 操作步骤 1. 标本固定:用丙酮或甲醇将标本(冰冻组织切片或新鲜组织涂片)固定于玻片上,-20℃,10分钟; 2. 抗Bcl-2抗体(1:40~1:80)室温孵育1小时; 3. PBS洗三次; 4. 用抗鼠抗体(桥联抗体)室温孵育1小时; 5. PBS洗三次; 6. 在APAAP溶液中孵育,室温30分钟; 7. PBS洗三次; 8. 加入Fast Red 底物直到出现明显的红色; 9. 以苏木素复染、封片、观察结果; 结果判断 Bcl-2蛋白显红色。 注意事项 Western blot方法中抗Bcl-2抗体与26KD的Bcl-2原癌基因产物结合。在离心细胞、细胞涂片、冰冻组织切片,抗体可与Bcl-2蛋白中的41-54位氨基酸结合。在常规固定的石蜡包埋组织切片中,由于抗原表位被封闭,因此抗体仅与较少量细胞反应。 编辑: hollyemp

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